細(xì)胞名稱:人胰腺癌細(xì)胞SW1990/LUC(帶熒光素酶)
細(xì)胞代次:P4
細(xì)胞規(guī)格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運輸費)
細(xì)胞凍存:無血清凍存液
細(xì)胞傳代:第一次建議1:2
細(xì)胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶,消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(換液后將瓶蓋擰松)
人胰腺癌細(xì)胞SW1990/LUC(帶熒光素酶),培養(yǎng)步驟
a、細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),傳代具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,使之完全脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL完全培養(yǎng)基重懸。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入到37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
b、細(xì)胞凍存:
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;
3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。
4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上再轉(zhuǎn)入液氮罐中。
C、細(xì)胞復(fù)蘇:
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3、棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4、第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項:有些細(xì)胞貼壁不牢,在運輸過程中容易發(fā)生細(xì)胞脫落,這是正?,F(xiàn)象。如脫離較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對比培養(yǎng)),沉淀加入胰酶1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代(兩個T25),補充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
人胰腺癌細(xì)胞SW1990/LUC(帶熒光素酶),售后服務(wù)
1. 細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);
2. 細(xì)胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結(jié)果,核實后重發(fā);
3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);
4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
5. 細(xì)胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實后予重發(fā);
6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。
2)細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
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GT1298LUC | SNB19/LUC | 人腦膠質(zhì)瘤SNB19/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1299LUC | snu1/LUC | 人胃癌細(xì)胞snu1/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉 |
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GT1302LUC | SUDHL10/LUC | 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞SUDHL10/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S懸浮生長 |
GT1303LUC | SUDHL4/LUC | 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞SUDHL4/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S懸浮生長 |
GT1304LUC | SUDHL6/LUC | 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞SUDHL6/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S懸浮生長 |
GT1305LUC | svhuc1/LUC | 人膀胱上皮細(xì)胞svhuc1/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | F12K+10%FBS+1%PS |
GT1306LUC | SW1116/LUC | 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞SW1116/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S貼壁生長速度慢,80%要傳代或凍存,消化時間約5~15min |
GT1307LUC | sw13/LUC | 人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞sw13/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1308LUC | sw1353/LUC | 人軟骨肉瘤細(xì)胞sw1353/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1309LUC | SW1990/LUC | 人胰腺癌細(xì)胞SW1990/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1310LUC | SW48/LUC | 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞SW48/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | DMEM+10%FBS+1%P/S貼壁生長 |
GT1311LUC | sw480/LUC | 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞sw480/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1312LUC | SW579/LUC | 人甲狀腺癌細(xì)胞SW579/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1313LUC | SW620/LUC | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞SW620/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1314LUC | SW6205/Fu/LUC | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株SW6205/Fu/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S貼壁 |
GT1315LUC | SW780/LUC | 人膀胱移行細(xì)胞癌SW780/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S |
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GT1317LUC | SW982/LUC | 人滑膜肉瘤細(xì)胞SW982/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | L15+10%FBS+1%P/S |
GT1318LUC | T2(174xcemT2)/LUC | 人淋巴母細(xì)胞T2(174xcem.T2)/LUC(帶熒光素酶) | 3500 | 1640+10%FBS+1%P/S |
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