河豚毒素ELISA檢測試劑盒使用說明書
貨號：Ounuo97001
本品采用競爭性酶免檢測技術(shù)用于鲀魚類肌肉、肝臟、皮膚等樣本中河豚毒素的定量分析，最大可滿足96次測試，在做復孔的情況下，一次最多可檢測42個樣本。
產(chǎn)品特性：
? 快速（＜30min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法
? 高靈敏度（1.5μg/kg,或ppb）和檢測限低（30μg/kg，或ppb）
? 快速，檢測時間＜1.5h
? 高的重現(xiàn)性
檢測限：
? 魚肉、肝臟、魚皮：30μg/kg
定量限：
? 魚肉、肝臟、魚皮：50μg/kg
一、使用須知：
當與儀器方法結(jié)果相比時，試劑盒的結(jié)果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因為儀器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標分子且還能識別結(jié)構(gòu)上相似的分子，包括其相關(guān)的代謝產(chǎn)物。因此，使用人員需要明白本產(chǎn)品的局限性和對數(shù)據(jù)做出合理的分析。
任何試劑、檢測程序的改變都可能導致檢測失敗。
不要使用超過有效期的產(chǎn)品；不同批次的產(chǎn)品不得混用。
實驗用水的質(zhì)量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。
微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個月內(nèi)使用完。
二、需要但未提供的設備和試劑：
? 酶標儀：配備450nm波長
? 單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支
? 多道移液器：30-300μL量程一支
? 白色、黃色和藍色吸頭若干
? 恒溫培養(yǎng)箱
? 均質(zhì)器或絞肉機
? 恒溫水浴鍋
? 甲醇，分析純
? 乙酸，分析純
三、樣本前處理：
一般來說，組織樣本在2-8℃最多保存1-2天，如長時間不用，建議分裝成適量小份于-20或-80℃保存，請勿使用反復凍融的樣本。【注釋：廢棄的陽性樣本應作為有毒廢棄物處理】
準備
(1) 樣本提取液
分別量取甲醇40mL、蒸餾水60mL、冰乙酸0.1mL混勻。
(2) 1×樣本稀釋液
按1份體積4×樣本稀釋液和3份體積的蒸餾水混勻。
魚肉、肝臟、魚皮
(1) 稱取2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋30s;
(2) 放置于90℃水浴中10min，期間手搖樣本3次；
(3) 自來水降溫1min，加入1mL正己烷渦旋30s；4000rpm，離心5min；
(4) 取中間層清液100μL，加入300μL 1×樣本稀釋液混勻，取50μL點樣
稀釋倍數(shù)：
20四、檢測步驟檢測前準備
? 所有試劑需回復至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;
? 檢測開始前需準備好所需試劑；
? 取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；
? 未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；
? 請不要在通風口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導致檢測失??；
? 標準品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應做有毒廢棄物處理。
檢測前準備
? 所有試劑需回復至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;
? 檢測開始前需準備好所需試劑；
? 取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；
? 未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；
? 請不要在通風口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導致檢測失??；
? 標準品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應做有毒廢棄物處理。
洗液（1×）配制
取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻
檢測步驟
(1) 移取50μL河豚毒素標準品至相應微孔中；
(2) 移取50μL樣本至相應微孔中；
(3) 移取50μL酶結(jié)合物至所有微孔中；
(4) 加入50μL河豚毒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；
(5) 室溫（20-25℃）孵育30min；
(6) 甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復4次，甩干并于無塵布上拍干；
(7) 加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育15min;
(8) 加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)
五、結(jié)果計算（1）以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進行線性擬合。
其中公式如下
logit(B/B0)=k ln?〖(concentration)+c〗①
B為標準品或樣本對應的吸光度；
B0為零標準品對應的吸光度；
logit(B/B0)=〖ln(〗?〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;
K為斜率；
C為截距
（2）計算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應的稀釋倍數(shù)，即為樣本中待測物最終濃度
關(guān)鍵字： 河豚毒素;河豚毒素檢測;TTX;Tetrotoxin;海洋毒素;
河南歐諾生物科技有限公司是一家產(chǎn)學研相結(jié)合、科工貿(mào)一體化的，集食品安全及動物防疫檢驗試劑的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及技術(shù)服務為一體的中國生物高科技企業(yè)。公司作為一家專門從事經(jīng)營食品安全檢測ELISA試劑盒的專業(yè)化公司，自公司成立以來，憑借優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，合理的價格，完善的服務，以及良好的信譽，得到了廣大客戶的認可和支持。? 歐諾OUNUO生產(chǎn)及代理用于檢測獸藥殘留類、霉菌毒素類、維生素類、海藻毒素類、激素類、工業(yè)污染物類、農(nóng)藥殘留類等酶聯(lián)免疫試劑盒，膠體金試紙條。旨在有效保證實驗室產(chǎn)品質(zhì)量，為客戶提供優(yōu)質(zhì)服務。我司現(xiàn)已成為：美國ABRaxis、美國HELICA，美國BIOO,美國BIOSTONE，英國朗道等進口品牌試劑盒特約優(yōu)秀代理商。