中文名：T7 RNA Transcription Enzyme Mix
英文名：T7 RNA Transcription Enzyme Mix
純度：醫(yī)藥級
貨號：T489304
包裝：10000t、1000t、50t
存儲溫度：-20°C儲存
產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品描述
作為生物大分子，mRNA只能通過體外轉(zhuǎn)錄（IVT，in vitro transcription）的方法大規(guī)模合成，T7啟動子是目前轉(zhuǎn)錄效率最高的啟動子之一，因此采用T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄可獲得更多的合成產(chǎn)物。T7 RNA Transcription Enzyme Mix進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的優(yōu)化，從模板DNA T7啟動子下游開始合成與DNA中一條鏈互補(bǔ)的RNA，簡單快速獲得大量的RNA分子。一個反應(yīng)可以轉(zhuǎn)錄高達(dá)150-200μg的RNA，轉(zhuǎn)錄合成的RNA可用于諸如mRNA疫苗的制備、RNA結(jié)構(gòu)與功能研究、RNA酶保護(hù)、探針雜交、RNAi、顯微注射及體外翻譯等多方面的下游應(yīng)用。
T7 RNA Transcription Enzyme Mix組成原酶利用大腸桿菌大規(guī)模發(fā)酵表達(dá)，采用藥用規(guī)格原輔料生產(chǎn)，并嚴(yán)格控制宿主蛋白質(zhì)殘留、核酸殘留等，符合GMP規(guī)范的產(chǎn)品生產(chǎn)與質(zhì)量管理規(guī)程保障生產(chǎn)過程及所有原輔料可追溯。
質(zhì)量要求
| 項目 |
標(biāo)準(zhǔn) |
| 外觀 |
澄明液體 |
| 可見異物 |
符合規(guī)定 |
| pH值 |
7.5-8.5 |
| 性能 |
1μl Enzyme Mix 產(chǎn)品可轉(zhuǎn)錄出不低于100μgRNA |
| 核酸內(nèi)切酶殘留 |
底物的降解不超過10% |
| 核酸外切酶殘留 |
底物的降解不超過10% |
| RNA酶殘留 |
底物的降解不超過10% |
| 細(xì)菌內(nèi)毒素含量 |
≤10EU/ml |
| 外源性DNA殘留 |
≤100pg/mg |
| 宿主蛋白質(zhì)殘留 |
≤50ppm |
| 支原體檢測 |
陰性 |
| 重金屬殘留 |
≤10ppm |
|
遵循以下規(guī)范生產(chǎn)
1. ISO 9001:2015, certified facility。
2. 《GMP附錄-細(xì)胞治療產(chǎn)品》國家藥品監(jiān)督管理局。
3. 《人用基因治療總論-中國藥典2020》國家藥典委。
4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products用于細(xì)胞治療，基因治療和組織工程產(chǎn)品中的輔料。
5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過程中細(xì)胞因子和生長因子。
6. Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products用于生產(chǎn)細(xì)胞或基因治療藥物的生物來源原料。
產(chǎn)品用途
1) 合成單鏈RNA，用于mRNA疫苗制備；
2) 合成高特異性RNA探針；
3) 合成siRNA前體；
4) 制作RNA剪接反應(yīng)（RNA splicing）的前體。
保存溫度
-20±5 ℃。
注意事項?
?1. 模板效率和孵化時間：
本試劑盒以1μg的模板投入量可以產(chǎn)生150-200μg的RNA，然而，不同模板的產(chǎn)量會因模板的序列、結(jié)構(gòu)、長度、純度以及特定RNA聚合酶啟動子的序列和長度而有所不同。影響轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量的污染物包括核糖核酸酶或污染物，如苯酚、微量金屬和SDS。
2. 優(yōu)化的反應(yīng):
推薦的反應(yīng)條件可適用于大多數(shù)模板的體外轉(zhuǎn)錄，但是，對于某些模板，可以通過延長反應(yīng)時間(4小時-過夜反應(yīng))，增加模板的用量來提高產(chǎn)率。
3. 模板含量：
下表總結(jié)了我們在調(diào)控模板數(shù)量方面的經(jīng)驗。結(jié)果可能因使用的模板而異，將反應(yīng)時間延長至4-6小時可增加RNA的產(chǎn)量。
| 模板量 |
RNA產(chǎn)量 |
| 1000ng(1μg) |
130-160μg |
| 500ng(0.5μg) |
110-130μg |
| 100ng(0.1μg) |
30-50μg |
| 50ng(0.05μg) |
15-25μg |
| 10ng(0.01μg) |
10-20μg |
| 1ng(0.001μg) |
3-8μg |
|
4. 保持RNase-free環(huán)境：
使用無RNase管和移液槍；
處理含有RNA的試劑盒組件或樣品時應(yīng)戴手套，并經(jīng)常更換手套，特別是接觸到RNase的潛在污染源，如門把手、鋼筆、鉛筆和人體皮膚后。
不使用時，應(yīng)將所有試劑密封好。在孵育過程中，將所有含有RNA的試管密封。
5.? 由于10×Transcription Buffer濃度偏高，高鹽環(huán)境會導(dǎo)致聚合酶失活，同時buffer中含有亞精氨成分，會與模板DNA形成沉淀，配制反應(yīng)液時需調(diào)整組分加樣順序，計算好體系，先加水，然后加buffer，NTP，最后加模板和酶，以防止10×的高濃度鹽離子對酶造成影響。
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關(guān)鍵字： T7 RNA Transcription Enzyme Mix;T7 RNA Transcription Enzyme Mix
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