中文名：2×常規(guī)PCR預(yù)混液（含染料）

英文名：Taq-Plus PCR Forest Mix (2x)

純度：2×

貨號：T295088

包裝：1ml、5ml、5ml

存儲溫度：-20°C儲存

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品簡介

Taq-Plus PCR Forest Mix (2x) 的濃度為 2×，使用方便快捷，能減少 PCR 操作過程中的污染，使用時只需取適量 Taq-Plus PCR Forest Mix (2x)， 加入模板和引物，并加入 ddH2O 補(bǔ)足體積，使反應(yīng)體系濃度為 1× 即 可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。 該 Mix 最長可擴(kuò)增 5 kb DNA 片段，具有良好的擴(kuò)增特異性和模 板兼容性，PCR 產(chǎn)物 3' 端帶 A 堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆。 PCR Mix 中包含兩種染料，PCR 產(chǎn)物無需添加 Loading Buffer 可直 接點(diǎn)樣電泳，且電泳過程中會出現(xiàn)兩個指示條帶。該染料不影響 PCR 擴(kuò)增效率，但對于需要對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行吸光度、熒光等光學(xué)分析的 實(shí)驗(yàn)，建議在分析前對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化，或使用無染料的 Taq-Plus PCR Master Mix (2x) 。

使用方法

1. 常規(guī) PCR 反應(yīng)體系

a. 引物推薦終濃度為 0.2~0.4 μM，效果不佳時可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內(nèi)進(jìn) 行調(diào)整； b. 不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同，以 50 μl 體系為例：模板為基因組 DNA 時， 一般推薦的使用量為 10~400 ng；當(dāng)模板為質(zhì)?；虿《?DNA 時，一般推薦的 使用量為 10 pg~20 ng。

2. 常規(guī) PCR 反應(yīng)程序

a. 該預(yù)變性條件適合絕大多數(shù)擴(kuò)增反應(yīng)，對于一些復(fù)雜模板，例如：菌液、菌落（尤 其是酵母）的 PCR 擴(kuò)增，預(yù)變性時間可適當(dāng)延長至 10 min，以提高預(yù)變性效果；

b. 關(guān)于延伸速率，當(dāng)目的片段長度不超過 2 kb 時，推薦使用 30 sec/kb；當(dāng)目的片段長度大于 2 kb 時，推薦使用 60 sec/kb。

注 : 如果使用酵母菌液作為 PCR 擴(kuò)增模板，建議目的片段長度不超過 2.5 kb，若超出 2.5 kb, 建議將酵母菌液預(yù)先進(jìn)行破壁處理。

3. 凝膠濃度對應(yīng)的染料遷移距離

注：染料會影響吸光度。

質(zhì)量控制 核酸內(nèi)切酶殘留檢測 將酶液與超螺旋質(zhì)粒 DNA 在 37℃溫育 4 h，通過 DNA 電泳檢測 質(zhì)粒無變化。 核酸外切酶殘留檢測 將酶液與雙鏈 DNA 底物在 37℃溫育 16 h，通過 DNA 電泳檢測 雙鏈 DNA 底物無變化。 穩(wěn)定性測試 室溫存放一周，無明顯活性改變。 功能檢測 以質(zhì)粒 DNA 和人基因組 DNA 為模板，擴(kuò)增 5k 和 3k 兩個片段，30 個循環(huán)后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測可見目的條帶。

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶殘留檢測：

將酶液與超螺旋質(zhì)粒 DNA 在 37℃溫育 4 h，通過 DNA 電泳檢測質(zhì)粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測：將酶液與雙鏈 DNA 底物在 37℃溫育 16 h，通過 DNA 電泳檢測雙鏈 DNA 底物無變化。

穩(wěn)定性測試：室溫存放一周，無明顯活性改變。

功能檢測：以質(zhì)粒 DNA 和人基因組 DNA 為模板，擴(kuò)增 5k 和 3k 兩個片段， 30 個循環(huán)后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測可見目的條帶。

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