中文名：RIPA裂解液（強）
英文名：RIPA Lysis Buffered Solution(Strong)
純度：無抑制劑
貨號：R301899
包裝：100ml
存儲溫度：2-8°C儲存
產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品介紹
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細胞快速裂解液，主要用于從動物組織和哺乳動物細胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解貼壁細胞和懸浮細胞。按照其裂解液的強度可以分為強、中、弱三類，可根據(jù)實驗需求選擇相應(yīng)產(chǎn)品。RIPA裂解液(強)可以有效提取細胞核、細胞膜和胞漿蛋白，提取的蛋白可應(yīng)用于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測分析。
使用方法
?(一)貼壁培養(yǎng)細胞
1.取本品置于室溫溶解混勻，根據(jù)實驗要求加入酶抑制劑。
2.去除貼壁細胞的培養(yǎng)液，用 PBS、NS 或無血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心，棄上清，留取沉淀。
3.按照 6 孔板每孔加入150～250μl 含有酶抑制劑的裂解液的比例，加入本品。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于細胞 1～3s 內(nèi)，細胞就會被裂解。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl。
4.10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5.后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細胞
1.取本品置室溫溶解混勻后，加入酶抑制劑。
2.低速離心懸浮細胞，棄上清，收集沉淀。
3.用手指輕彈細胞，使其松散。按照 6 孔板每孔細胞加入150～250μl含有酶抑制劑的裂解液的比例，加入本品。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細、胞沉淀。
4.10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5.進行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)組織樣本
1.取本品置于室溫溶解混勻后，加入酶抑制劑。
2.把組織剪切成細小的碎片，越小越好。
3.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
4.按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有酶抑制劑的裂解液。冰上或4℃裂解 15～30min。
5.步驟 3、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有酶抑制劑的本品。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
6.10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
7.進行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項
1.去除貼壁細胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。
2.如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
3.如果細胞量較多，必需分裝成 50～100 萬細胞/離心管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
4.如果組織樣品本身非常細小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 Vorte× 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
5.在低溫情況下有可能出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，可 37℃水浴促其溶解，不會影響使用效果；溶解時間不易過長，避免有效成分失效。
6.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物。在不檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。
7.細胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或 4℃進行。
使用范圍
適用于一般生物學(xué)及醫(yī)學(xué)研究
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