中文名：羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

英文名：Rhodamine-Phalloidin

貨號：P378705

包裝：300t、50t

存儲溫度：避光,-20°C儲存

產(chǎn)品介紹：

這種橙色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物（相當(dāng)于TRITC 標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽）會選擇性結(jié)合F-肌動蛋白。鬼筆環(huán)肽衍生物經(jīng)常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)或無細(xì)胞實驗中用于標(biāo)記、鑒定和定量F-肌動蛋白的便捷探針。鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白絲的結(jié)合比與肌動蛋白單體的結(jié)合要緊密得多，從而導(dǎo)致肌動蛋白亞基從絲端解離的速率常數(shù)降低，從而通過防止絲解聚而基本穩(wěn)定了肌動蛋白絲。而且，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動蛋白的ATP水解活性。鬼筆環(huán)肽在細(xì)胞中不同濃度下的功能不同。當(dāng)以低濃度引入細(xì)胞質(zhì)時，鬼筆環(huán)肽將聚合度較低的胞質(zhì)肌動蛋白和纖維蛋白吸收到聚集的肌動蛋白聚合物的穩(wěn)定“島”中，但它不會干擾應(yīng)力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是研究F-肌動蛋白在細(xì)胞中分布的有效工具，方法是用熒光類似物標(biāo)記鬼筆環(huán)肽并將其用于染色肌動蛋白絲以進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的肌動蛋白絲以及體外觀察單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)的重要工具。

鬼筆環(huán)肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。它是特異性結(jié)合于F-肌動蛋白的雙環(huán)肽。因此用熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可以非常方便的研究F-肌動蛋白的分布。鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。在pH升高時，該硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽失去對肌動蛋白的親和力。

單位定義：一個單位（T）的定義是染色一個加載細(xì)胞的載玻片所用染料的量

Abs/Em (nm)：546/575

應(yīng)用范圍：

細(xì)胞骨架染色
使用方法：

1. 儲液制備

羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍干的粉末，制備成 200T/mL 的儲液（300T 規(guī)格染料加入 1.5 mL 的液體，50T 規(guī)格染料加入 0.25 mL 的液體即可）。

羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽的一個單位（T）的定義是染色一個加載細(xì)胞的載玻片所用染料的量。對于羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽，使用時的推薦稀釋比例為 1: 40-1: 200，一個單位相當(dāng)于 200 μL 總?cè)旧w積中加入 1-5 μL 200T/mL 儲備溶液。

注：稀釋比例可以根據(jù)實際染色效果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

2. 固定細(xì)胞染色

以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或 8 孔室玻片上的貼壁細(xì)胞的染色步驟。鬼筆環(huán)肽也可用于染色固定的冷凍或石蠟組織切片。

（1）用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次。

（2）用含有 3.75%甲醛的 PBS 溶液固定細(xì)胞，冰上固定 15 min。

注：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最好避免含有任何甲醇的固定劑。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

（3）用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次。

（4）用含 0.5% Triton X-100 的 PBS 溶液在室溫下透化細(xì)胞 10 min。

（5）用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次。

（6）用 200 μL PBS 稀釋 1-5 μL 熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽儲液，加入一個蓋玻片或孔中，室溫孵育 20 min，進(jìn)行染色。

注：染色體積可根據(jù)樣本情況進(jìn)行調(diào)節(jié)。孵育過程中為避免染液揮發(fā)，可將蓋玻片放于密封容器內(nèi)。

（7）用 PBS 清洗細(xì)胞 2-3 次。

（8）熒光顯微鏡觀察。標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽具有很好的光穩(wěn)定，樣品可以在 PBS 中成像，但為了效果最佳，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察。

3. 活細(xì)胞染色

熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽不具有細(xì)胞透性，因此沒有被廣泛用于活細(xì)胞標(biāo)記。然而，有報道稱活細(xì)胞可能通過胞飲或未知機(jī)制進(jìn)行標(biāo)記。一般來說，染色活細(xì)胞時需要更多的染料。或者，熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可被注入到細(xì)胞中用于監(jiān)測肌動蛋白分布和細(xì)胞運動

注意事項：

1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實驗；

2. 本產(chǎn)品為凍干粉形式，微量不易觀察，使用前請瞬時離心，加適當(dāng)溶劑溶解后使用，溶解后的溶液近乎透明色；

3.若配制成水溶液，應(yīng)小量分裝保存。

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