中文名：富馬酸檢測試劑盒

英文名：Fumarate Assay Kit

純度：96T

貨號：F486219

包裝：1kit

存儲溫度：-20°C儲存

產品介紹：

本試劑盒僅供研究使用。

使用目的：?

本試劑盒用于測定樣本中延胡索酸(fumric cid)的含量。?

實驗原理：?

本試劑盒應用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中延胡索酸(fumric cid)水平。用純化的延胡索酸(fumric cid)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入延胡索酸(fumric cid)，和 HRP 標記的延胡索酸(fumric cid)抗原，使它們競爭結合，經過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的延胡索酸(fumric cid)的含量呈負相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中延胡索酸(fumric cid)的含量。

試劑盒組成：
1. 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶
2. 酶標試劑 6ml×1 瓶
3. 酶標包被板 12 孔×8 條
4. 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶
5. 顯色劑 B 液 6ml×1 瓶
6. 終止液 6ml×1/瓶
7. 樣品稀釋液 6ml×1/瓶
8. 標準品 S1（200ng/L） 0.5ml×1 瓶
標準品 S2（100ng/L） 0.5ml×1 瓶
標準品 S3（50ng/L） 0.5ml×1 瓶
標準品 S4（25ng/L ） 0.5ml×1 瓶
標準品 S5（12.5ng/L） 0.5ml×1 瓶
9.? 封板膜 2 張?

標本要求 ：

1．標本處理：（1）水樣 采集后經 -20℃反復凍融三次，再經玻璃纖維過濾后，備查 （2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相 關文獻提取進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗， 可將標本放于-20℃保存，備查?

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。?

操作步驟：

1. 加樣：分別設標準孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加 50 微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

2. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。?

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。?

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用?

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘.?

7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。?

8. 測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。 ?

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 1 小時后方可使用，酶標包被板開封后如未用完， 板條應裝入密封袋中保存。?

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。?

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在 5 分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。?

4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。?

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。?

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.?

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。?

9．本試劑不同批號組分不得混用。 ?

檢測范圍：

4ng/L -250ng/L?

保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃。?

2．有效期：6 個月

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