中文名：雙鏈DNA酶
英文名：dsDNase
純度：≥90%
貨號：D397988
包裝：1kit
存儲溫度：-20°C儲存
產品介紹：
產品組成
| 貨號 |
組分 |
規(guī)格 |
| D397988A-50μl |
dsDNase |
50μl |
| D397988B-200μl |
10× dsDNase Buffer |
200μl |
|
產品簡介
dsDNase 是一種核酸內切酶，能夠裂解 DNA 中的磷酸二酯鍵， 生成帶有 5'- 磷酸和 3'- 羥基末端的寡核苷酸。dsDNase 能夠特異性的消化雙鏈 DNA（double-stranded DNA, dsDNA）而不會消化單鏈 DNA、引物、探針和 RNA。dsDNase 具有熱敏感性，可在 55℃條件下快速失活。dsDNase 主要用于反轉錄實驗前快速去除 RNA 樣本中的基因組 DNA 污染，與傳統(tǒng)的使用 DNase I 去除基因組 DNA 污染 的方法相比，無需額外加入 EDTA 失活，可減少對 RNA 的損傷，同時節(jié)省實驗時間，保證 RNA 水平定量的準確性。
活性定義
根據 Kunitz 實驗方法，在 25℃ pH 5.0 的條件下，以過量的大分 子 DNA 為底物，在 260 nm 波長處每分鐘能引起吸光度增加 0.001 的 酶量定義為 1 個活性單位（U）。
儲存緩沖液
25 mM Tris-HCl (pH7.5，@25℃ ), 2.0 mM MgCl2, 10 mM NaCl, 0.01 % (v/v) Triton X-100, 50 % (v/v) glycerol。
抑制與失活
抑制條件：金屬離子、EDTA、SDS、DTT、β- 巰基乙醇、高鹽 離子濃度等會抑制 dsDNase 的活性；失活條件：55℃溫育 5 min。?
質量控制
蛋白質純度：通過 SDS-PAGE 并考馬斯亮藍染色，該酶純度 ≥90%。
RNA 酶活性檢測：將酶液與 RNA 底物 在 37 溫育 1 h，通過凝膠電泳檢測沒有發(fā)現 RNA 底物降解。
功能檢測：該產品被用于測試去除來自 RNA 樣本中的基因組 DNA 并進行了 RT-qPCR 擴增，發(fā)現去除率 ≥99.9%。RNA 數量不受 dsDNase 處理的影響。
使用方法
1. 于冰上配制如下反應體系：
2. 輕輕吹打混勻反應體系后，將以上混合液在 37℃溫育 2~5 min；
3. 65℃熱失活 2 min，迅速將獲得的 RNA 置于冰上，用于后續(xù)實驗。
長期保存請置于 -80℃，避免反復凍融。
注意事項
1. 若 RNA 樣本下游用于 RT-PCR，且目的基因長度 ≥3 kb，失活步驟前
需添加終濃度為 10 mM 的 DTT；
2. 為避免 RNA 降解，可在反應體系中加入適量的 RNase Inhibitor。
常見問題
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關鍵字： 雙鏈DNA酶;dsDNase
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