中文名：銅檢測試劑盒
英文名：Copper Assay Kit
純度：足以進行96次色度測試
貨號：C486478
包裝：1kit
存儲溫度：2-8°C儲存
產(chǎn)品介紹：
檢測原理：在酸性條件下，銅離子從銅藍蛋白上解離下來，與絡(luò)合劑3,5-DiBr-PAESA反應(yīng)，產(chǎn)生紫色絡(luò)合物，在一定范圍內(nèi)吸光度值與濃度成正比。
用途：本試劑盒適用于檢測血清、血漿、動物組織樣本中銅離子含量。
樣本類型： 血清;血漿;動物組織
靈敏度： 1.84 μmol/L
檢測范圍： 1.84-60 μmol/L
精密度： 批間差：3.1% | 批內(nèi)差：3%
檢測儀器及波長： 酶標儀（575-585 nm）
產(chǎn)品組成：
| 組分 | 規(guī)格 | 儲存條件 | | 試劑A 顯色劑 A | 35 mL×1 瓶 | 2-8°С 避光保存 6 個月 | | 試劑B 顯色劑 B | 粉劑×2 支 | 2-8°С 避光保存 6 個月 | | 試劑C 100 μmol/L 銅離子標準品 | 1 mL×1 支 | 2-8°С 保存 6 個月 | | 96 孔酶標板?? | 1 板 | | | 96 孔覆膜? | 2 張 | | | 樣本位置標記表 | 1 張 | |
對于體積較少的試劑，使用前請先離心，以免量取不到足夠量的試劑。
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使用方法：
一、所需自備物品
儀器：酶標儀（575-585 nm）、37℃恒溫箱
試劑：雙蒸水
二、試劑準備
① 檢測前，試劑盒中的試劑平衡至室溫，試劑一37°C孵育直至澄清。
② 試劑二工作液的配制：
臨用前，取一支試劑二，加入1.25 mL雙蒸水混勻，即為試劑二工作液，2-8℃保存5天。
③ 顯色劑工作液：
將試劑一：試劑二工作液按14：1的體積比混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
④ 不同濃度標準品的稀釋：
編號? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??? ? ? ? ①? ?②? ?③? ?④? ?⑤? ?⑥???⑦? ?⑧
標準品濃度(μmol/L)? ? ? 0? ? ?5? ? 10? ?20? 30? 40? ?50? 60
100 μmol/L 標準品(μL) 0? ? ?5? ??10? ?20??30? 40? ?50? 60
雙蒸水(μL)? ? ? ? ? ? ? ? ? ?100 95? ?90? ?80? 70? 60? ?50? 40
三、樣本準備
① 樣本處理
樣本要求：血漿樣本不能用 EDTA、檸檬酸鹽等螯合劑作為抗凝劑。建議使用肝素作為抗凝劑
血清血漿樣本：直接進行測定。
組織樣本：勻漿介質(zhì)為雙蒸水，勻漿離心取上清待測，留取部分上清用于蛋白濃度測定。
② 樣本的稀釋
在正式檢測前，需選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本稀釋成不同濃度進行預(yù)實驗，根據(jù)預(yù)實驗的結(jié)果，結(jié)合本試劑盒的線性范圍：1.84-60 μmol/L。
四、實驗關(guān)鍵點
① 血清、血漿樣本須澄清，避免溶血。血漿抗凝劑必須是肝素。
② 在通風(fēng)良好的地方操作。
五、操作步驟
① 標準孔：取20 μL 8個不同濃度的標準品，分別觸底加入對應(yīng)的標準孔中；
測定孔：取20μL待測樣本，觸底加入樣本孔中。
② 向步驟①中各孔加入300 μL顯色劑工作液。
③ 蓋上覆膜，37℃孵育5 min。
④ 酶標儀580 nm，測各孔OD值。
六、操作表
| | 標準孔 | 測定孔 | | 不同濃度的標準品(μL)? | 20 | | | 待測樣本(μL)???? | | 20 | | 顯色劑工作液(μL)?? | 300 | 300 |
檢測組織樣本時，需測定總蛋白濃度，推薦使用本公司BCA試劑盒(貨號E-BC-K318-M)進行測定。
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七、結(jié)果計算
標準品擬合曲線：y = ax + b
血清(漿)中銅離子濃度計算公式：
銅離子含量（μmol/L）= (ΔA580 - b) ÷ a × f
組織樣本中銅離子濃度計算公式：
銅離子含量(μmol/gprot) = (ΔA580- b) ÷ a ÷ Cpr × f
注解:
y：標準孔OD值-空白孔OD值(標準品濃度為0時的OD值)
x：標準品的濃度
a：標準曲線斜率
b：標準曲線截距
ΔA580：樣本測定OD值-空白OD值
Cpr：待測樣本的蛋白濃度(gprot/L)
f：樣本加入檢測體系前的稀釋倍數(shù)
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