中文名：ECL Plus 超敏發(fā)光液

英文名：ECL Plus

貨號：E266188

包裝：100ml、500ml

存儲溫度：2-8°C儲存,避光,干燥

產品介紹：

包裝：100ml（50ml+50ml）,500ml（250ml+250ml）

產品描述

ECL Plus超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關聯(lián)的抗原?？赏℉RP實現低皮克級的免疫印跡檢測。

（1）可使用更高的抗體稀釋倍數(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體。

（2）簡單易用—?可替代其它公司的ECL發(fā)光底物，操作步驟無需進行特別優(yōu)化

（3）靈敏度更高—?可檢測低皮克級的蛋白

（4）信號持續(xù)時間更長—?光信號持續(xù)時間長達5小時

（5）更多成像方法—?適用于X射線膠片、CCD或激光成像儀

（6）價格更經濟

應用

用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。

使用方法

1.?執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉膜和Western Blot步驟。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。

操作概述

?注：優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度，以保證陽性結果。

1)?將一抗?jié)舛认♂尩?.05～1ug/ml

2) 將二抗?jié)舛认♂尩?.005～0.04ug/mL

3) 將兩種底物組份按1:1比例混合，制備底物工作液。

注：暴漏于日光或任何其他強光可能損害工作液，為獲得最佳結果，將此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免長期暴漏于任何強光。短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液。

4) 將印跡膜在ECL底物工作液中孵育5分鐘。

5) 吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。

6)? 使印跡膜在X光膠片上曝光。

2.?Western Blot最后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液A和B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

3.?用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發(fā)光工作液（0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質是酶促反應，使用過少的發(fā)光工作液不利反應進行，也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。

4.?用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。

5.?打開X光膠片暗盒，在暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內，蛋白帶面向上。

6.?暗房內壓X光膠片，分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖洗。???????????

儲存
4 ℃密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。

安全性
無特殊毒性，按普通化學品處理。

注意事項

（1）步驟1～5可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

（2）長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。

（3）發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數小時并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。

（4）由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗。

（5）某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜。

（6）使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

（7）NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%。

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