凝血酶來源于牛血漿;Thrombin from bovine plasma
分子量: 37KD
簡介:凝血酶(Thrombin)來源于牛血漿,分子量37KD,是由兩條肽鏈(31KD和6KD)通過二硫鍵組成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子Ⅱ)激活后形成的蛋白質水解酶,其催化纖維蛋白原(Fibrinogen)水解掉A肽和B肽,由此形成纖維蛋白單體,單體進一步聚合,在血小板、紅細胞和白細胞等參與下形成血凝塊。
物理性狀及指標:
外觀:………………………………白色凍干粉或塊狀物
溶解性:…………………………… 生理鹽水
純度:………………………………SDS-PAGE檢測圖譜無雜蛋白條帶
比活度:……………………………不得低于 2000 單位/mgpr
凍干粉儲存條件:2-8℃,避光防潮密閉干燥
儲液配置:
儲備溶液可在生理鹽水中以100單位/ml的濃度制備。由于凝血酶溶液吸附到玻璃上,因此建議將溶液等份放入塑料管中,并在-20°C下儲存。
產(chǎn)品特點:
1、純度高:SDS-PAGE檢測圖譜無雜蛋白條帶;
2、比活高:比活力不低于 2000 單位/mgpr;可以PK最好的進口產(chǎn)品,目前沒有檢索到更高比活的國產(chǎn)同類產(chǎn)品;
3、不含有其他蛋白酶活性;
4、滅活病毒:生產(chǎn)過程中采用S/D法和干熱法兩步滅活病毒;
5、性價比及其突出,尤其對于工業(yè)客戶,國內(nèi)產(chǎn)品的價格,國際頂尖產(chǎn)品質量。
使用說明:
(一)融合蛋白切割
由于凝血酶具有切割序列專一性強,水解效率高的特點,它被廣泛地應用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā),其應用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質的特異性斷裂,尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學、分子生物學等研究。
凝血酶是一種廣泛用于切割標簽的蛋白酶,能夠有效切質量比僅為1:2000的蛋白。切割可在20℃到37℃之間切割0.3到16小時。凝血酶最佳的切割位點是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸,一些經(jīng)常使用的識別位點是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和MY-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他識別位點是 X2-R[K]-X1', 這里X2 或者 X1'是甘氨酸,例如A-R-G和G-K-A,這里切割發(fā)生在第二個殘基后。在凝血酶切割位點和N末端標簽之間插入五個甘氨酸殘基可改善切,通過這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達到完全切割,而且也可以避免可能發(fā)生的錯誤切割。有效的消化緩沖液是20mM Tris-HCl緩沖液,含150mM氯化鈉,pH8.0。凝血酶可從切割產(chǎn)物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。
(二)血小板聚集試驗
凝血酶與血小板表面的凝血酶受體結合,活化血小板,使血小板粘附和聚集。
血小板聚集實驗參照文獻:兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol/L檸檬酸鈉,111 mmol/L葡萄糖,53 mmol/L檸檬酸)0.15體積比抗凝,200 g離心10 min,離心2次,取上清,800g離心15 min。沉淀中加Tyrode—Hepes緩沖液(140 mmol/L NaCl,5 mmol/L KCl,1 mmol/L MgCl2,10 mmol/L Hepes,10mmol/L葡萄糖,pH 7.4)調(diào)節(jié)至血小板數(shù)為(3~4)×1011/L。血小板聚集用血液凝集儀來測定。血小板懸液(0.2ml )與藥物溫育1 min,然后用凝血酶(500 u/L)作用5 min,記錄聚集情況。
【注意】
●我司產(chǎn)品為非無菌包裝,若用于細胞培養(yǎng),請?zhí)崆白鲱A處理,除去熱原細菌,否則會導致染菌。
●部分產(chǎn)品我司僅能提供部分信息,我司不保證所提供信息的權威性,以上數(shù)據(jù)僅供參考交流研究之用。
關鍵字: 凝血酶來源于牛血漿;凝血酶;Thrombin from bovine;Thrombin;
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