Xeno-free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基
一、產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell ? Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基 |
貨 號(hào) | AC-1001003 |
規(guī) 格 | 基礎(chǔ)培養(yǎng)基450mL，添加劑50mL |
運(yùn)輸保存條件 | 基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20℃至-80℃；混合后2-8℃ |
使用范圍 | 人類骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng) |
保質(zhì)期 | 12個(gè)月 |
二、產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基是埃澤思生物（Applied Cell?）自主研發(fā)的一款無外源動(dòng)物成分的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基?？蓱?yīng)用于人骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)，并保持其多向分化潛能。本產(chǎn)品內(nèi)毒素水平遠(yuǎn)低于中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)過程遵循ISO9001體系,并符合GMP指導(dǎo)原則。
Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分：氨基酸，維生素、無機(jī)鹽、白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素，細(xì)胞因子等。
三、產(chǎn)品特性
l 無外源動(dòng)物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險(xiǎn)。
l 全程無血清生產(chǎn)，極大降低批次間差異。
l 可用于原代分離，且培養(yǎng)過程無需包被培養(yǎng)板。
l 擴(kuò)增效率高，24h左右增殖翻倍，節(jié)省培養(yǎng)時(shí)間。
l 內(nèi)毒素<0.06EU/ml，遠(yuǎn)低于中國(guó)藥典水平
四、產(chǎn)品內(nèi)容
組分 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 運(yùn)輸 |
Human Mesenchymal Stem Cell Basal Medium 人間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 450mL | 1瓶 | 冰袋 |
Human Mesenchymal Stem Cell Supplement 人間充質(zhì)干細(xì)胞添加劑 | 50mL | 1瓶 | 干冰 |
五、相關(guān)產(chǎn)品
無血清細(xì)胞凍存液（治療級(jí)）（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001006）
人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-2001003）
人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-2001004）
細(xì)胞消化液（Applied Cell?: Cat. no. AC-1001024）
六、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1. 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基配制
1.1. 37℃快速解凍人間充質(zhì)干細(xì)胞添加劑，快速溶解時(shí)不易破壞添加劑中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，時(shí)間大致為10min。待添加劑融化后搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲(chǔ)存于-20℃至-80℃，避免反復(fù)凍融 。
1.2. 將添加劑以10%比例加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻，即為人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）。混合后培養(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲(chǔ)存2-3周，不建議使用已配制超過3周的培養(yǎng)基。
1.3. 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基可直接應(yīng)用于人類骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)。
七、操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)
1. hMSC細(xì)胞復(fù)蘇(10cm dish)
1.1. 從液氮中取出凍存的hMSC細(xì)胞，迅速將凍存管放入37℃水浴快速融解。
1.2. 在生物安全柜或超凈臺(tái)中，將解凍后的細(xì)胞懸液緩慢加入5 mL預(yù)溫的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）。
1.3. 1200rpm 離心3 min，吸掉上清，加入10ml人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
1.4. 將細(xì)胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動(dòng)培養(yǎng)皿使細(xì)胞均勻分布，5% CO2的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)。
1.5. 24h后更換新鮮人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每2-3天更換培養(yǎng)液。
2. hMSC細(xì)胞傳代培養(yǎng)
2.1. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%，即可傳代。
2.2. 在超凈臺(tái)/安全柜中，吸掉原有培養(yǎng)基，加入PBS溶液清洗一次，加入細(xì)胞消化液（AC-1001024）使之完全覆蓋皿/瓶底。
2.3. 室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-4分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。
2.4. 加入消化液2倍體積的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散。
2.5. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1200 rpm離心3 min。
2.6. 棄上清，加入人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)。1：3-1：4比例傳代，或按1-2x104 cells/cm2 傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意：細(xì)胞傳代所需的時(shí)間：2-4天。5代及之前的細(xì)胞，生長(zhǎng)速度較快。5代以后的細(xì)胞，生長(zhǎng)速度稍緩。
3. hMSC細(xì)胞凍存
3.1. 細(xì)胞達(dá)到90%匯合度， 吸掉原有培養(yǎng)基，PBS清洗一次。
3.2. 加入細(xì)胞消化液（AC-1001024）使之完全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育4-5min或37℃孵育2-4min分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。
3.3. 加入消化液2倍體積的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散。
3.4. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1200 rpm離心3 min，吸掉上清。
3.5. 加入適量無血清細(xì)胞凍存液（治療級(jí)）（AC-1001006），調(diào)整細(xì)胞凍存密度在1×106 cells/mL
3.6. 左右，每支凍存管分裝1.5-2ml。
3.7. 直接放入-80℃，24h后轉(zhuǎn)入液氮中長(zhǎng)期保存。
八、細(xì)胞形態(tài)圖
九、質(zhì)量控制
檢驗(yàn)項(xiàng)目 Test Catagories | 參考數(shù)據(jù) Reference Data |
外觀 Physical Appearance | 橙紅色液體 Orange-red Liquid |
澄清度 Clarity | 澄清 Clear |
pH值 pH Value | 7.0-7.4 |
滲透壓 Osmolality | 270-340 （mosm/KgH2O） |
細(xì)菌內(nèi)毒素 Endotoxin | 小于0.06 EU/ml |
無菌 Sterility | 無菌 Sterility |
支原體 Mycoplasma | 0.11um過濾，支原體試驗(yàn)為陰性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration |
細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn) Cell Growth Test | 細(xì)胞為梭形，呈指紋狀或螺旋狀生長(zhǎng) The cells are spindle - shaped, fingerlike or spiral |
關(guān)鍵字： 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基;人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基無酚紅;人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基有酚紅;MSC培養(yǎng)基; Xeno-free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng);
埃澤思生物總部位于上海，公司取名Applied Cell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治aize 療、再生埃澤思生物總部位于上海，公司取名AppliedCell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)提供核心原料，以及研發(fā)服務(wù)（CRO ）和生物藥委托開發(fā)生產(chǎn)服務(wù)（CDMO）的生物科技公司。目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細(xì)胞、免疫細(xì)胞治療全流程試劑原料。其中核心產(chǎn)品已經(jīng)完成美國(guó)FDADMF備案以及國(guó)家藥品評(píng)審中心（CDE）藥物原輔料備案，是國(guó)內(nèi)資質(zhì)最為齊全的細(xì)胞治療原料供應(yīng)商之一。目前，公司已與國(guó)內(nèi)6家細(xì)胞治療企業(yè)進(jìn)行細(xì)胞治療一類新藥聯(lián)合申報(bào)，一項(xiàng)日本一類新藥聯(lián)合申報(bào)。