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人參莖葉總皂苷照高效液相色譜法(附錄 Ⅵ D )測(cè)定。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取人參皂苷 Re 對(duì)照品 5mg ,置 5ml 量瓶中,加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品約 50mg ,置 25ml 量瓶中,加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對(duì)照品溶液 20µl 、 40µl 、 80µl 、 120µl 、 160µl 、 200µl ,分別置于具塞試管中,低溫?fù)]去溶劑,加入 1% 香草醛高氯酸試液 0.5ml ,置 60 ℃ 恒溫水浴上充分混勻后加熱 15 分鐘,立即用冰水冷卻 2 分鐘,加入 77% 硫酸溶液 5ml ,搖勻,以相應(yīng)試劑作空白,照紫外 - 可見(jiàn)分光光度法(附錄 Ⅴ A ),在 540nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),以濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法精密吸取供試品溶液 50µl ,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,自“置于具塞試管中”起操作,依法測(cè)定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液的含量,計(jì)算結(jié)果乘以 0.84 ,即得。本品按干燥品計(jì)算,含人參總皂苷以人參皂苷 Re ( C 48 H 82 O 18 )計(jì),應(yīng)為 75% ~ 95% 。人參皂苷 Rg 1 、 Re 、 Rd 照高效液相色譜法(附錄 Ⅵ D )測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相 A ,以 0.1% 磷酸溶液為流動(dòng)相 B ,以下表進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)為 203nm 。理論板數(shù)按人參皂苷 Re 峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000 。時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相 A (%)流動(dòng)相 B (%) 0 ~ 30 19 81 30 ~ 35 19→24 81→76 35 ~ 60 24→40 76→60 對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷 Rg 1 對(duì)照品、人參皂苷 Re 對(duì)照品和人參皂苷 Rd 對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,加甲醇制成 1ml 中含人參皂苷 Rg 1 0.30mg ,人參皂苷 Re0.50mg 和人參皂苷 Rd 0.20mg 的混合溶液。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品約 20mg ,置 10ml 量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液 20μl 與供試品溶液 5 ~ 20μl ,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。本品按干燥品計(jì)算,含人參皂苷 Rg 1 ( C 42 H 72 O 14 ),人參皂苷 Re ( C 48 H 82 O 18 ),人參皂苷 Rd ( C 48 H 82 O 18 )的總量應(yīng)為 30% ~ 45% 。
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