產(chǎn)品編號(hào)：QR1017

制品內(nèi)容

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本產(chǎn)品 GeL & PCR Purification Kit 既適用于從普通或低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中回收DNA 片段，也可用于 P°CR 產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物中 DNA 片段的純化，能夠有效去除蛋白質(zhì)、有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核昔酸引物等雜質(zhì)。該試劑盒適用于 100 bp~30 kb 大小DNA片段的回收，回收率高達(dá) 80% 以上，每個(gè)離心吸附柱每次可吸附的 DNA 量約為 10 g,洗脫體積不低于 30 μL。該試劑盒純化回收的 DNA 純度高，完整性好，下游可用于酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。

保存： 室溫保存

使用方法

瓊脂糖凝膠回收

(1). 使用前請(qǐng)先確認(rèn) Buffer PW 中已經(jīng)加入相應(yīng)體積的無(wú)水乙醇

(2). 將目的 DNA 條帶從瓊脂糖凝膠中切下 (盡量切除多余凝膠)，放入干凈的離心管(自備)中，稱量計(jì)算凝膠重量(提前記錄離心管重量并扣除)。注意：較大的膠塊可以切碎，以保證溶膠效果。

(3). 向凝膠中加入 3 倍體積的溶膠液 Buffer PN (凝膠體積的計(jì)算方法舉例：若凝膠的重量為 100 mg，其體積可視為 100 μL（以此類(lèi)推）;置于65 ℃溫育，期間每隔2~3 min 溫和地上下顛倒離心管，以確保膠塊完全溶解。

(4). 待上述溶膠液溫度降至室溫后再加入到吸附柱中，室溫放置 2 min，12000 rpm 離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

注意 1: 當(dāng)回收片段< 500 bp 時(shí)，溶膠液轉(zhuǎn)移到吸附柱前需要先加入 1 倍膠體積的異丙醇，上下顛倒混勻。

注意 2: 吸附柱的容積為 800 μL，若體積大于 800 μL 可分批加入。

(5). 向吸附柱中加入600 μL漂洗液 Buffer PW (確認(rèn)已經(jīng)加入無(wú)水乙醇) ，12000 rpm 離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。注意:如果回收的 DNA 下游是用于鹽感的實(shí)驗(yàn)（例如: 平末端連接或直接測(cè)序）建議加入漂洗液后靜置 2~5 min 再離心。

(6). 重復(fù)步驟（5）。

(7). 將吸附柱放入收集管中，12000 rpm 離心1 min 去除殘留的漂洗液，將吸附柱室溫放置2~5 min，保證乙醇徹底揮發(fā)。

注意: 漂洗液中殘留的乙醇會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。

(8). 將吸附柱放到新的 1.5 mL 離心管中，向吸附膜中間懸空加入 30~50 μL 洗脫液 Buffer EB，室溫放置 2 min，12000 rpm 離心1 min。收集到的即為 DNA 溶液，可立即使用或置于 -20°°C保存。

注意 1: 洗脫液 EB 的體積不應(yīng)少于 30 μL，體積過(guò)少會(huì)影響回收的效率。

注意 2: 將洗脫液 EB 加熱至 65°C再洗脫，可明顯提高回收效率。

PCR 產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物回收

（1） 使用前請(qǐng)先確認(rèn) Buffer PW 中已經(jīng)加入相應(yīng)體積的無(wú)水乙醇

（2） 根據(jù) P°CR 反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液體積，向其中加入3 倍體積的 Buffer PN，充分混勻。

（3） 將上述溶液加入到吸附柱中，室溫放置 2 min，12000 rpm 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

注意 1: 當(dāng)回收片段< 500 bp 時(shí),上述溶液轉(zhuǎn)移到吸附柱前需要先加入1倍樣品體積的異丙醇,上下顛倒混勻。

注意 2: 吸附柱的容積為 800 μL，若體積大于 800 pL 可分批加入。

（4） 向吸附柱中加入 600 μL 漂洗液 Buffer Pw (確認(rèn)已經(jīng)加入無(wú)水乙醇) ，12000 rpm 離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。個(gè)注:如果回收的 DNA 下游是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)(例如: 平末端連接或直接測(cè)序) ，建議加入漂洗液后靜置 2~5 min 再離心。