標(biāo)本要求：石蠟/冰凍切片

在同一組織細(xì)胞標(biāo)本上需要同時(shí)檢測(cè)兩種抗原 時(shí)，需進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧ｋp重免疫熒光標(biāo)記法(double immunofluorescence labeling method)也分為直接法和間接法。

(1)直接法雙重免疫熒光標(biāo)記：將標(biāo)記有兩種不同熒光素的抗體(如抗A和抗B)以適當(dāng)比例混合，滴加在標(biāo)本上孵育，然后洗去未結(jié)合的熒光抗體，在熒光顯微鏡下分別選擇兩種相應(yīng)的激發(fā)濾片觀察，即可對(duì)兩種抗原 進(jìn)行定位和定量。直接法簡(jiǎn)便可靠，但靈敏度較低。

(2)間接法雙重免疫熒光標(biāo)記：用未標(biāo)記的兩種特異性抗體孵育組織或細(xì)胞，洗去多余的抗體后，再用兩種不同的熒光素分別標(biāo)記的第二抗體孵育組織或細(xì)胞，洗去多余的第二抗體，后在熒光顯微鏡下分別選擇兩種相應(yīng)的激發(fā)濾片觀察，從而對(duì)兩種抗原 進(jìn)行定位和定量。使用此法應(yīng)注意兩種特異性抗體必須來(lái)源于不同種屬，且熒光標(biāo)記第二抗體的種屬必須與抗體的種屬相匹配。

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