石蠟包埋組織樣品制備方法

以下操作依據(jù)組織大小及致密程度而定

1、組織的采集、固定和保存：

可依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康募敖M織的特點(diǎn)而考慮采用不同的固定和保存方法。此處只介紹實(shí)驗(yàn)室常用方法。
采取組織后，4%多聚甲醛(4%PFA)4°C 固定1小時(shí)(根據(jù)組織大小和致密程度調(diào)整固定時(shí)間)或過(guò)夜，PBS緩沖液洗三次，每次10min至1小時(shí)，于30%、50%乙醇中各10 min至1小時(shí)，4°C保存于70%乙醇中。

固定后的樣品經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明，52-54°C石蠟包埋，常規(guī)切片，切片厚4 -10mm，貼于處理過(guò)的干凈載玻片上，34°C烤片過(guò)夜，之后收集于載片盒中，4°C密封保存。

切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇復(fù)水，于蘇木精中室溫染色5-20 min，迅速用水沖洗切片，至組織切片變藍(lán)，鏡檢。用0.1-0.5%鹽酸乙醇分色1～2秒鐘，也可用50ml H2O中加一滴氨水分色，效果亦好(如染色程度恰好，也可省略分色步驟)。之后用流水沖洗切片，直至切片變藍(lán)，此稱藍(lán)化。切片經(jīng)梯度乙醇至95%乙醇中，于0.5%伊紅中染色1～5秒或更長(zhǎng)時(shí)間，95%乙醇洗去殘色，若顏色太深，可在低濃度的乙醇中脫色，鏡檢。無(wú)水乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。普通光鏡觀察，室溫干燥條件下保存染色切片。