項目 | Western Blot實驗 |
實驗原理 | 該技術是根據(jù)抗原抗體的特異性結合原理來檢測復雜樣品中的某種蛋白質。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細胞或者組織樣本中的蛋白，經(jīng)轉膜、封閉后目標蛋白與特有性一抗結合，再與辣根過氧化物酶（HRP）標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色，分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標蛋白在樣本中的表達情況 |
應用 | ·廣泛應用于蛋白表達水平檢測 ·鑒定某種蛋白質，也可以對目標蛋白進行定量和半定量的分析 ·可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后續(xù)分析 |
優(yōu)點 | ·所需要的設備方便，成本低，使用靈活 ·操作簡單，結果一般比較穩(wěn)定，而且陽性結果一般較為可靠 ·結果分析與質譜相比較為容易
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Western Blot實驗主要流程：
目前，Western Blot因其便捷的優(yōu)點，加之電泳及電轉設備、抗體和信號檢測系統(tǒng)的成熟商品化，多種技術不斷進步共同提高了檢測的靈敏度，使得Western blot技術成為幾乎每一個進行蛋白質研究的實驗室至關重要的實驗之一。在一般的實驗室中都能夠進行Western blot技術操作，但在實驗過程中也會經(jīng)常遇到各種問題。
Western Blot實驗中經(jīng)常出現(xiàn)的問題及對策：
實驗問題 | 可能原因 | 推薦辦法 |
目的條帶未顯現(xiàn) | 目的蛋白的表達量過低 | 提高上樣量，濃縮目的蛋白，采用更高靈敏度的試劑盒 |
使用抗體效價不足 | 使用新配制的一抗，避免反復凍融；增加一抗或者二抗?jié)舛?，適當延長孵育時間 |
轉膜效率低 | 選擇合適的轉膜方式，提高轉膜效率 |
非平行、彎曲條帶 | 電泳遷移速度過快或遷移溫度過高 | 調整電泳設置如PH值、電壓等，電泳時降低環(huán)境溫度。 |
背景過高 | 封閉條件不合適 | 延長封閉時間或更換封閉劑 |
抗體濃度過高 | 降低一抗/二抗?jié)舛炔⒀娱L孵育時間 |
抗體與封閉劑發(fā)生交叉反應 | 加溫和去污劑如Tween20。
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我們的服務優(yōu)勢：
--針對不同的蛋白樣品，艾普蒂生物采用不同的蛋白濃度測定方法（Lowry法或BCA法）
--保證實驗的質量，嚴格的QC質控：利用內參準確定量，同一樣品，蛋白濃度定量值多次實驗間差異小于8%
--不同人員之間可重復性：保證結果的準確性
--完整的技術服務，我們能夠提供從基因合成，細胞轉染，載體構建，蛋白表達及純化，蛋白功能研究等技術服務
--多年的抗體研究經(jīng)驗，對抗體選擇具有豐富的知識儲備，能從根源上避免假陽性結果
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關鍵字： Western Blot;Western Blot服務;Western Blot技術服務;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內科研試劑領域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗的專業(yè)技術團隊和企業(yè)管理團隊組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細胞、化學品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
我們長期聚焦于生命科學、生物醫(yī)藥、醫(yī)療診斷、分析檢測等領域，專注于為生命科學和生物技術領域的客戶提供優(yōu)質的產(chǎn)品和技術服務。提供生命科學 試劑、供應鏈服務等，為更多的生命科學科研工作者提供 專業(yè)、全面、安全、快捷的產(chǎn)品和服務。產(chǎn)品覆蓋 基因、蛋白、細胞、組織、動物等水平的各種研究。
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