4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)是一種重要的氫離子緩沖劑，其在pH為6.8～8.2的范圍內(nèi)具有良好的緩沖能力，能較長時(shí)間控制恒定的pH。使用濃度為10～50mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/L4-羥乙基哌嗪乙磺酸即可具有良好的緩沖能力，且對細(xì)胞無毒性作用。使用方法(1)hepes緩沖液可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,再過濾除菌.每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH調(diào)pH至7.2,濾過除菌后使用.此時(shí)HEPES的使用濃度為10mmol/L.(2)亦可配成100x貯存液（lmol/L），使用前取99ml培養(yǎng)液加入lml貯存液，最終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。lmol/L（100x）hepes緩沖液配制方法:取23.8gHEPES溶于90ml雙蒸水中,用lNNaOH調(diào)pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,過濾除菌,分裝小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存.應(yīng)用HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸）是一種非離子兩性緩沖液，具有高度極性，對多種化學(xué)試劑和酶呈惰性，不參加和不干擾生物化學(xué)反應(yīng)的過程，對酶化學(xué)反應(yīng)等無抑制作用，因此可專門用于對細(xì)胞器和極易變性的、pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作。制備方法直接使用1,2-二氯乙烷作為溶劑，在裝有機(jī)械攪拌、溫度計(jì)的100mL的三口瓶中加入羥乙基哌嗪（5.00g,0.02mol)，碳酸鉀K2CO3（6.00g，0.04mol），50mL1,2-二氯乙烷，油浴加熱90℃（1,2-二氯乙烷沸點(diǎn)85℃），攪拌反應(yīng)20h。停反應(yīng)，過濾，用200mL乙酸乙酯（EA）洗滌濾出的鹽。濾液旋干，得2.6gHEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸）固體。用途用作生化試劑用途生物緩沖劑；分離與分析RNA核組分的反應(yīng)緩沖液、預(yù)雜交緩沖液、雜交緩沖液；用于RNA與T4RNA用途分子生物學(xué)級用于用T4RNA連接酶進(jìn)行RNA3'-末端標(biāo)記，分離與分析核RNA之反應(yīng)緩沖液組分、預(yù)雜交緩沖液緩和雜交緩沖液成分用途細(xì)胞-細(xì)胞黏附，細(xì)胞短期聚集培養(yǎng)，清洗組織、細(xì)胞所用緩沖液