用途
該試劑盒用于體外定量檢測(cè)Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組CFD濃度
檢測(cè)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人CFD抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人CFD會(huì)與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人CFD抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人CFD抗體與結(jié)合在包被抗體上的人CFD結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,CFD濃度與OD450值之間呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中CFD的濃度。
反應(yīng)類型 | 夾心法 |
規(guī)格 | 96T |
反應(yīng)時(shí)間 | 3.5h |
反應(yīng)性 | Human |
檢測(cè)方法 | Colormetric |
檢測(cè)范圍 | 1.56—100 ng/mL |
靈敏度 | 0.94 ng/mL |
樣本體積 | 100μL |
樣本類型 | 血清,血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測(cè)樣本中的人CFD,且與其它相關(guān)蛋白無(wú)明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同(如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等),標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會(huì)有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(ng/mL) | O.D | Average | Corrected |
---|
100 | 2.575 2.513 | 2.544 | 2.484 |
50 | 1.634 1.62 | 1.627 | 1.567 |
25 | 0.996 0.929 | 0.963 | 0.903 |
12.5 | 0.465 0.47 | 0.468 | 0.408 |
6.25 | 0.265 0.268 | 0.267 | 0.207 |
3.13 | 0.185 0.18 | 0.183 | 0.123 |
1.56 | 0.119 0.124 | 0.122 | 0.062 |
0 | 0.057 0.062 | 0.06 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測(cè)20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測(cè)20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean (ng/mL) | 4.66 | 11.33 | 46.40 | 4.89 | 12.36 | 41.26 |
Standard deviation | 0.28 | 0.57 | 1.92 | 0.24 | 0.60 | 2.12 |
C V (%) | 6.01 | 5.03 | 4.14 | 4.91 | 4.85 | 5.14 |
回收率
分別往5個(gè)不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
---|
Serum (n=8) | 92-106 | 100 |
EDTA plasma (n=8) | 97-106 | 102 |
Cell culture media (n=8) | 93-100 | 96 |
線性
分別往5個(gè)樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。將5個(gè)樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
---|
1:2 | Range (%) | 97-108 | 94-104 | 92-105 |
Average (%) | 102 | 99 | 99 |
1:4 | Range (%) | 92-102 | 94-105 | 86-96 |
Average (%) | 98 | 101 | 93 |
1:8 | Range (%) | 95-109 | 91-107 | 96-103 |
Average (%) | 102 | 99 | 99 |
1:16 | Range (%) | 100-109 | 90-103 | 93-103 |
Average (%) | 103 | 96 | 97 |
注意事項(xiàng):
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣
4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染
6、底物請(qǐng)避光保存。
7、嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
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關(guān)鍵字: 人補(bǔ)體因子D(CFD)Elisa試劑盒;人補(bǔ)體因子D(CFD);人補(bǔ)體因子D;
湖北艾普蒂生物工程有限公司(簡(jiǎn)稱:艾普蒂)由在國(guó)內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成,專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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