線性化聚乙烯亞胺(簡稱:線性PEI)分兩種分子量25K和40K。兩者區(qū)別:1)PEI 25K轉(zhuǎn)染溶液通常需要幾個小時才能制備,PEI 25K含有4-1 1%的殘余丙?;?,可防止聚合物主鏈與DNA強(qiáng)烈結(jié)合。2)PEI MAX 40K完全水解(完全去乙?;慕Y(jié)構(gòu)意味著每批產(chǎn)品的表現(xiàn)始終如),可以在兩個小時內(nèi)轉(zhuǎn)化為即用型溶液。3)PEI MAX 40K比PEI25K更易于使用,并且更高效,含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,其質(zhì)子化氮水平比PEI25000提高11%以上。分下面分別推薦一種簡單適用而高效的方法,講述如何配制濃度為lmg/mL的轉(zhuǎn)染試劑的配制。提前準(zhǔn)備器材:1 L玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、pH計(jì)、移液器、磁力攪拌棒、帶油管的真空泵1g的PEI 25K #FSF0001或者1g的PEI MAX 40K#FSF0002、IL純水(Milli-Q@純水,注射用水(WFI),或類似的生物級水)、1N氫氧化鈉、25mL無菌塑料吸管、一次性0.1μm, 0.2um, 0.22μm PES真空無菌過濾器、無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。配制過程:1g的PEI 25K#FSF0001→900mL水溶解→攪拌、加熱(60-80°C)→加HCl調(diào)pH到2.0左右→蓋上燒杯,攪拌3h(直至粉末完全溶解)→冷卻至室溫→加NaOH調(diào)pH到6.9-7.1→移液到量筒,加水補(bǔ)足至1L→真空過濾消毒→分裝,-20°C保存。1g的PEI MAX 40K#FSF0002→900mL 水→溶解攪拌、加熱(60-80°C)→加1N NaOH調(diào)pH到6.9-7.1→移液到量筒,加水補(bǔ)足至1L→真 空過濾消毒→分裝, 4° C保存。注意:加熱或加酸都有助于PEI溶解(特別是配制PEI 25K,只加熱溶解不了,需要適當(dāng)加酸的),詳細(xì)用量可試加一點(diǎn)攪拌看看,足夠溶解就行,不一定需要加到pH那么低。轉(zhuǎn)染液貯存和保存期:分裝存放在無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶中PEI 25K溶液可在-20°C保存長達(dá)一年,部分解凍的溶液可在4°C保存2周,不可反復(fù)凍融。PEI MAX 40K轉(zhuǎn)染溶液在4° C可保持其性能至少6個月效果,穩(wěn)定存放此溶液可能適用一年。不可反復(fù)凍融。
我司也提供直接配好的溶液。
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