用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組IgG4濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人IgG4抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人IgG4會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IgG4抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人IgG4抗體與結(jié)合在包被抗體上的人IgG4結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，IgG4濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中IgG4的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 夾心法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時(shí)間 | 3.5h |
| 反應(yīng)性 | Human |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 31.25—2000 ng/mL |
| 靈敏度 | 18.75 ng/mL |
| 樣本體積 | 100μL |
| 樣本類型 | 血清，血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的人IgG4，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| (ng/mL) | O.D | Average | Corrected |
|---|
| 2000 | 2.42
2.459 | 2.44 | 2.377 |
| 1000 | 1.684
1.61 | 1.647 | 1.584 |
| 500 | 0.928
0.958 | 0.941 | 0.88 |
| 250 | 0.479
0.489 | 0.484 | 0.421 |
| 125 | 0.268
0.265 | 0.267 | 0.204 |
| 62.5 | 0.183
0.188 | 0.186 | 0.123 |
| 31.25 | 0.121
0.116 | 0.119 | 0.056 |
| 0 | 0.061
0.065 | 0.063 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(ng/mL) | 81.17 | 235.97 | 825.66 | 94.22 | 235.10 | 921.35 |
Standard
deviation | 4.76 | 11.04 | 34.10 | 5.05 | 10.79 | 43.76 |
| C V (%) | 5.86 | 4.68 | 4.13 | 5.36 | 4.59 | 4.75 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 87-97 | 92 |
| EDTA plasma (n=8) | 84-95 | 92 |
| Cell culture media (n=8) | 90-98 | 94 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 101-107 | 101-112 | 93-100 |
| Average (%) | 104 | 104 | 97 |
| 1:4 | Range (%) | 83-98 | 86-96 | 91-98 |
| Average (%) | 90 | 92 | 94 |
| 1:8 | Range (%) | 90-100 | 95-111 | 92-106 |
| Average (%) | 94 | 103 | 98 |
| 1:16 | Range (%) | 97-105 | 90-102 | 87-95 |
| Average (%) | 102 | 94 | 92 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
艾普蒂生物 品牌保障：
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1、高效、靈敏、特異的抗體;
2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
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關(guān)鍵字： 人免疫球蛋白G4(IgG4);人免疫球蛋白G4;Human IgG4 elisa kit;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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