用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組ANXA1濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人ANXA1抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人ANXA1會與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ANXA1抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人ANXA1抗體與結(jié)合在包被抗體上的人ANXA1結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,ANXA1濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中ANXA1的濃度。
反應(yīng)類型 | 夾心法 |
規(guī)格 | 96T |
反應(yīng)時間 | 3.5h |
反應(yīng)性 | Human |
檢測方法 | Colormetric |
檢測范圍 | 0.31—20 ng/mL |
靈敏度 | 0.19 ng/mL |
樣本體積 | 100μL |
樣本類型 | 血清,血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的人ANXA1,且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同(如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等),標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(ng/mL) | O.D | Average | Corrected |
---|
20 | 2.327 2.337 | 2.332 | 2.253 |
10 | 1.454 1.51 | 1.482 | 1.403 |
5 | 0.879 0.861 | 0.87 | 0.791 |
2.5 | 0.448 0.466 | 0.457 | 0.378 |
1.25 | 0.228 0.226 | 0.227 | 0.148 |
0.63 | 0.182 0.162 | 0.172 | 0.093 |
0.31 | 0.12 0.134 | 0.127 | 0.048 |
0 | 0.070 0.086 | 0.079 | -- |
精密度板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean (ng/mL) | 0.91 | 2.01 | 9.28 | 0.88 | 2.07 | 9.54 |
Standard deviation | 0.06 | 0.09 | 0.47 | 0.05 | 0.10 | 0.51 |
C V (%) | 6.59 | 4.48 | 5.06 | 5.68 | 4.83 | 5.35 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
---|
Serum (n=8) | 91-104 | 96 |
EDTA plasma (n=8) | 91-108 | 99 |
Cell culture media (n=8) | 94-107 | 101 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
---|
1:2 | Range (%) | 89-100 | 93-110 | 97-110 |
Average (%) | 95 | 100 | 104 |
1:4 | Range (%) | 93-104 | 85-99 | 89-101 |
Average (%) | 99 | 91 | 95 |
1:8 | Range (%) | 90-102 | 80-93 | 83-93 |
Average (%) | 97 | 87 | 88 |
1:16 | Range (%) | 91-108 | 85-98 | 83-94 |
Average (%) | 98 | 91 | 88 |
注意事項(xiàng):
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
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關(guān)鍵字: 人膜聯(lián)蛋白-A1(Anxa1);Human ANXA1;人膜聯(lián)蛋白-A1;
湖北艾普蒂生物工程有限公司(簡稱:艾普蒂)由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊和企業(yè)管理團(tuán)隊組建而成,專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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