用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組FPN濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人FPN抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人FPN會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人FPN抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素?？谷薋PN抗體與結合在包被抗體上的人FPN結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，F(xiàn)PN濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中FPN的濃度。
| 反應類型 | 夾心法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應時間 | 3.5h |
| 反應性 | Human |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 0.31—20 ng/mL |
| 靈敏度 | 0.19 ng/mL |
| 樣本體積 | 100μL |
| 樣本類型 | 血清，血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的人FPN，且與其它相關蛋白無明顯交叉反應。
重復性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術、洗板技術和穩(wěn)定條件等），標準曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標準曲線。
| (ng/mL) | O.D | Average | Corrected |
|---|
| 20 | 2.416
2.442 | 2.429 | 2.363 |
| 10 | 1.75
1.758 | 1.754 | 1.688 |
| 5 | 0.985
0.975 | 0.98 | 0.914 |
| 2.5 | 0.489
0.493 | 0.491 | 0.425 |
| 1.25 | 0.272
0.246 | 0.259 | 0.193 |
| 0.63 | 0.183
0.163 | 0.173 | 0.107 |
| 0.31 | 0.117
0.123 | 0.12 | 0.054 |
| 0 | 0.056
0.076 | 0.066 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(ng/mL) | 0.92 | 2.31 | 7.33 | 0.98 | 2.22 | 6.66 |
Standard
deviation | 0.05 | 0.12 | 0.23 | 0.06 | 0.10 | 0.29 |
| C V (%) | 5.43 | 5.19 | 3.14 | 6.12 | 4.50 | 4.35 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 85-96 | 90 |
| EDTA plasma (n=8) | 93-104 | 99 |
| Cell culture media (n=8) | 90-102 | 95 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 88-100 | 88-100 | 91-104 |
| Average (%) | 94 | 94 | 98 |
| 1:4 | Range (%) | 88-100 | 80-93 | 85-97 |
| Average (%) | 95 | 86 | 91 |
| 1:8 | Range (%) | 93-106 | 84-97 | 84-100 |
| Average (%) | 98 | 89 | 91 |
| 1:16 | Range (%) | 86-101 | 83-97 | 89-100 |
| Average (%) | 93 | 89 | 94 |
注意事項：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果
3、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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