用途
該試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中天然β-CTx濃度。
檢測原理
本試劑盒采用競爭ELISA法。用人β-CTx抗原包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人β-CTx與包被的人β-CTx競爭生物素標(biāo)記的抗人β-CTx單抗上的結(jié)合位點(diǎn)，游離的成分被洗去。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，人β-CTx濃度與OD450值之間呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人β-CTx的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 競爭法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時間 | 2.0h |
| 反應(yīng)性 | 人 |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 125.00-8000 pg/mL |
| 靈敏度 | 75.00 pg/mL |
| 樣本體積 | 50μL |
| 樣本類型 | 血清、血漿或其他相關(guān)生物液體 |
特異性
可檢測樣本中的人β-CTx，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| (pg/mL) | O.D | Average |
|---|
| 8000 | 0.347
0.375 | 0.361 |
| 4000 | 0.448
0.47 | 0.459 |
| 2000 | 0.646
0.622 | 0.634 |
| 1000 | 0.905
0.909 | 0.907 |
| 500 | 1.272
1.246 | 1.259 |
| 250 | 1.623
1.609 | 1.616 |
| 125.00 | 1.898
1.898 | 1.898 |
| 0 | 2.292
2.3 | 2.296 |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| | Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(pg/mL) | 399.60 | 1081.00 | 2908.70 | 419.00 | 1051.00 | 2875.80 |
Standard
deviation | 26.80 | 62.70 | 130.90 | 23.90 | 49.40 | 158.20 |
| C V (%) | 6.71 | 5.80 | 4.50 | 5.70 | 4.70 | 5.50 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 84-95 | 90 |
| EDTA plasma (n=8) | 94-105 | 99 |
| Cell culture media (n=8) | 92-106 | 99 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。
| | | Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 86-100 | 93-107 | 87-98 |
| Average (%) | 92 | 101 | 92 |
| 1:4 | Range (%) | 86-101 | 92-107 | 100-113 |
| Average (%) | 93 | 99 | 106 |
| 1:8 | Range (%) | 90-103 | 89-102 | 94-108 |
| Average (%) | 96 | 96 | 102 |
| 1:16 | Range (%) | 87-103 | 87-100 | 95-109 |
| Average (%) | 94 | 93 | 100 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計(jì)算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
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4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型!
關(guān)鍵字： 人β-骨膠原交聯(lián)（β-CTx）;人β-骨膠原交聯(lián);人β-骨膠原交聯(lián) elisa試劑盒;Human β-CTx elisa試劑盒;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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