用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組AQP-1濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人AQP-1抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人AQP-1會與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人AQP-1抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素??谷薃QP-1抗體與結(jié)合在包被抗體上的人AQP-1結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,AQP-1濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中AQP-1的濃度。
反應(yīng)類型 | 夾心法 |
規(guī)格 | 96T |
反應(yīng)時間 | 3.5h |
反應(yīng)性 | Human |
檢測方法 | Colormetric |
檢測范圍 | 125.00—8000 pg/mL |
靈敏度 | 75.00 pg/mL |
樣本體積 | 100μL |
樣本類型 | 血清,血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的人AQP-1,且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同(如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等),標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
---|
8000 | 2.629 2.669 | 2.649 | 2.59 |
4000 | 1.835 1.857 | 1.846 | 1.787 |
2000 | 1.094 1.078 | 1.086 | 1.027 |
1000 | 0.562 0.579 | 0.571 | 0.512 |
500 | 0.301 0.295 | 0.298 | 0.239 |
250 | 0.188 0.16 | 0.174 | 0.115 |
125.00 | 0.114 0.12 | 0.117 | 0.058 |
0 | 0.053 0.065 | 0.059 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean (pg/mL) | 399.90 | 1101.92 | 3738.97 | 437.93 | 1190.85 | 3925.00 |
Standard deviation | 20.03 | 59.28 | 118.15 | 26.54 | 49.18 | 174.27 |
C V (%) | 5.01 | 5.38 | 3.16 | 6.06 | 4.13 | 4.44 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
---|
Serum (n=8) | 93-108 | 99 |
EDTA plasma (n=8) | 87-100 | 93 |
Cell culture media (n=8) | 92-103 | 98 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
---|
1:2 | Range (%) | 90-104 | 95-106 | 87-101 |
Average (%) | 95 | 101 | 93 |
1:4 | Range (%) | 86-98 | 83-98 | 82-94 |
Average (%) | 93 | 90 | 89 |
1:8 | Range (%) | 91-103 | 81-91 | 89-102 |
Average (%) | 96 | 86 | 95 |
1:16 | Range (%) | 93-109 | 83-96 | 81-95 |
Average (%) | 100 | 89 | 87 |
注意事項(xiàng):
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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關(guān)鍵字: 人水通道蛋白1(AQP-1);人水通道蛋白1 elisa試劑盒;人水通道蛋白1;Human AQP-1 elisa試劑盒;
湖北艾普蒂生物工程有限公司(簡稱:艾普蒂)由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成,專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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