用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組COL4濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人COL4抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人COL4會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人COL4抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人COL4抗體與結(jié)合在包被抗體上的人COL4結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，COL4濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中COL4的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 夾心法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時間 | 3.5h |
| 反應(yīng)性 | Human |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 0.78—50 ng/mL |
| 靈敏度 | 0.47 ng/mL |
| 樣本體積 | 100μL |
| 樣本類型 | 血清，血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的人COL4，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| (ng/mL) | O.D | Average | Corrected |
|---|
| 50 | 2.38
2.44 | 2.41 | 2.322 |
| 25 | 1.668
1.67 | 1.669 | 1.581 |
| 12.5 | 1.038
0.998 | 1.018 | 0.93 |
| 6.25 | 0.516
0.532 | 0.524 | 0.436 |
| 3.13 | 0.317
0.287 | 0.302 | 0.214 |
| 1.57 | 0.204
0.18 | 0.192 | 0.104 |
| 0.78 | 0.134
0.148 | 0.141 | 0.053 |
| 0 | 0.081
0.095 | 0.086 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(ng/mL) | 2.47 | 4.27 | 17.11 | 2.66 | 4.21 | 18.63 |
Standard
deviation | 0.16 | 0.23 | 0.53 | 0.17 | 0.19 | 0.87 |
| C V (%) | 6.48 | 5.39 | 3.10 | 6.39 | 4.51 | 4.67 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 88-100 | 93 |
| EDTA plasma (n=8) | 92-106 | 99 |
| Cell culture media (n=8) | 86-102 | 93 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 89-104 | 87-99 | 95-109 |
| Average (%) | 95 | 93 | 101 |
| 1:4 | Range (%) | 87-99 | 87-99 | 87-100 |
| Average (%) | 94 | 93 | 94 |
| 1:8 | Range (%) | 92-105 | 84-96 | 81-95 |
| Average (%) | 98 | 89 | 88 |
| 1:16 | Range (%) | 91-105 | 81-94 | 84-97 |
| Average (%) | 96 | 88 | 89 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計(jì)算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
艾普蒂生物 品牌保障：
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1、高效、靈敏、特異的抗體;
2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體;
4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型!
關(guān)鍵字： Human COL4 ELISA Kit;人Ⅳ型膠原(COL4);人Ⅳ型膠原 COL4 ELISA Kit;人 COL4 ELISA KIT;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
我們長期聚焦于生命科學(xué)、生物醫(yī)藥、醫(yī)療診斷、分析檢測等領(lǐng)域，專注于為生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。提供生命科學(xué) 試劑、供應(yīng)鏈服務(wù)等，為更多的生命科學(xué)科研工作者提供 專業(yè)、全面、安全、快捷的產(chǎn)品和服務(wù)。產(chǎn)品覆蓋 基因、蛋白、細(xì)胞、組織、動物等水平的各種研究。
致力于成長為我國重要的生命科學(xué)試劑和成果轉(zhuǎn)化一體化的領(lǐng)導(dǎo)者、致力于成為中國大型的科研試劑產(chǎn)品供應(yīng)商之一。