參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：羅西奧病毒PCR檢測試劑盒
型號　:　　 EY00P1009
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
實驗操作過程：
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進行梯度稀釋， 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下：
1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，
輕微振蕩混勻，簡短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標(biāo)記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。
3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中，  然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時快速離心 5s，渦旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。
5,按表 2 依次進行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。
                                 表 2. CHO control DNA 的稀釋

二、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備
根據(jù)待測樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加樣濃度  (以制備加 45pg  CHO control DNA 的樣本 ERC 為例)，操作如下：
1，取待測樣本 100u，加至 1.5ml 干凈的離心管中；
2，加入 1.5ul SD2，混勻，標(biāo)記為樣本 ERC。
注：樣本 ERC 和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。
三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備

根據(jù)實驗設(shè)置陰性質(zhì)控，操作如下：
1，取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標(biāo)記為陰性質(zhì)控 NEG。 注：陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。
四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣
1，根據(jù)所要檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線及待測樣本數(shù)量，計算所需反應(yīng)孔數(shù)，一般做 3 個重復(fù)孔/樣。
反應(yīng)孔數(shù)=  (6 個濃度梯度+1 個無模板對照 NTC+1 個陰性質(zhì)控 NEG+待測樣本×2) ×3 注：待測樣本×2 是為了讓每個待測樣本檢測時都同時做樣本 ERC 。                  2，根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算本次實驗所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix：
2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul    (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×2ul
3，各試劑置于冰上融化，振蕩混勻，按表 3 所示進行加樣：
                                  表 3.各反應(yīng)孔加樣示例

注意事項
1.整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。
7.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
 BTC Others Human  BTC / Betacellulin 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 酞菁鎂(II)質(zhì)量規(guī)格：Magnesium(II) Phthalocyanine

CM-R090大鼠前脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL酞菁錫(II)質(zhì)量規(guī)格：Tin(II) Phthalocyanine

HS-746T細(xì)胞，胃癌細(xì)胞系 神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞,SK-N-MC細(xì)胞 牛胚氣管細(xì)胞;EB (NBL-4)酞菁二鋰(>93.0%(N))質(zhì)量規(guī)格：>93.0%(N)Dilithium Phthalocyanine

CHO-K1(倉鼠卵巢細(xì)胞亞株) 5×106cells/瓶×24-氨基鄰苯二甲腈(>98.0%(N))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)4-Aminophthalonitrile

CD200 Others Human  CD200 / OX-2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二苯并-24-冠8-(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)Dibenzo-24-crown 8-Ether

羅西奧病毒PCR檢測試劑盒Z-Ala-Ala-Leu-pNAZ-Ala-Ala-Leu-pNA質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR  飲料果膠化學(xué)比色法定量檢測試劑盒20  豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

三亞甲基碳酸酯TMC 質(zhì)量規(guī)格： 度≥99%  MouseL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit小鼠L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  humanphospholipidscramblase1,PLSCR1ELISA試劑盒人1脂爬行酶1(PLSCR1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

碳酸錳(>98%,BR)Manganese (II) carbonate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒 ，英文名： IGFBP-1 ELISA Kit  ELISAKitIL-1α豬白介素1α規(guī)格：48T/96T

維生素B2（標(biāo)準(zhǔn)品）vitamin B2質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品  小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA檢測試劑盒Mouseoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit 96T/48T  Humancytotoxin,CTXELISAKit人細(xì)胞(CTX)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

酵母浸粉；酵母粉Yeast extract質(zhì)量規(guī)格：FMB Grade  調(diào)料乙酸激酶法定量檢測試劑盒20  周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISA試劑盒 ，英文名： CDK-1 ELISA Kit

核糖核酸酶 A 溶液RNase A Solution質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級,>60 U/mg,10 mg/ml  Ratplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISA試劑盒大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  Humanoponi,Tn-TELISA試劑盒人肌鈣蛋白T(Tn-T)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

氯氟吡氧乙酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Fluroxypyr質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品  小鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白2(MAP2)ELISA試劑盒 ，英文名： MAP2 ELISA Kit  ELISAKitPIAb-IgG/IgM小鼠1脂酰肌醇抗體IgG/IgM規(guī)格：48T/96T

麥穗寧（標(biāo)準(zhǔn)品）Fuberidazole質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品  兔載脂蛋白E(Apo-E)ELISA檢測試劑盒RabbitApolipoproteinE,Apo-EELISAKit 96T/48T  Humanai-myelinaibodyIgA,AMAIgAELISAKit人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(MCV)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T