參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：出血性大腸桿菌O157:H7(EHEC O157)核酸檢測(cè)試劑盒
型號(hào)　:　　 EY00P1406
產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程：
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進(jìn)行梯度稀釋， 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下：
1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，
輕微振蕩混勻，簡(jiǎn)短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標(biāo)記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。
3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中，  然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時(shí)快速離心 5s，渦旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。
5,按表 2 依次進(jìn)行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。
                                 表 2. CHO control DNA 的稀釋

二、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備
根據(jù)待測(cè)樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加樣濃度  (以制備加 45pg  CHO control DNA 的樣本 ERC 為例)，操作如下：
1，取待測(cè)樣本 100u，加至 1.5ml 干凈的離心管中；
2，加入 1.5ul SD2，混勻，標(biāo)記為樣本 ERC。
注：樣本 ERC 和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備

根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性質(zhì)控，操作如下：
1，取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標(biāo)記為陰性質(zhì)控 NEG。 注：陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣
1，根據(jù)所要檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線及待測(cè)樣本數(shù)量，計(jì)算所需反應(yīng)孔數(shù)，一般做 3 個(gè)重復(fù)孔/樣。
反應(yīng)孔數(shù)=  (6 個(gè)濃度梯度+1 個(gè)無(wú)模板對(duì)照 NTC+1 個(gè)陰性質(zhì)控 NEG+待測(cè)樣本×2) ×3 注：待測(cè)樣本×2 是為了讓每個(gè)待測(cè)樣本檢測(cè)時(shí)都同時(shí)做樣本 ERC 。                  2，根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix：
2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul    (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×2ul
3，各試劑置于冰上融化，振蕩混勻，按表 3 所示進(jìn)行加樣：
                                  表 3.各反應(yīng)孔加樣示例

注意事項(xiàng)
1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
 EPOR Others Mouse 小鼠 EPOR 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 乙基黃原酸鉀(>95%,BC)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BCPotassium O-ethyl xanthate

小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞;BV2油酸鉀(>96%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>96%,BRPotassium oleate

CX3CL1 Others Canine 狗 Fractalkine / CX3CL1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1酸氫二鉀三水(分子生物學(xué)級(jí))質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,分子生物學(xué)級(jí)Potassium phosphate, dibasic, trihydrate

HuH-7肝癌細(xì)胞1酸三鉀三水(>98%,BC)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BCPotassium phosphate, tribasic trihydrate

LIEP-P細(xì)胞，小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 前列腺癌細(xì)胞,UI-1細(xì)胞 臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHUAEC NA井岡霉素質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRValidamycin

出血性大腸桿菌O157:H7(EHEC O157)核酸檢測(cè)試劑盒吡羅昔康Piroxicam質(zhì)量規(guī)格：>97%,USP grade  小鼠載脂蛋白A2(APOA2)ELISA試劑盒 ，英文名： APOA2 ELISA Kit  ELISAKitICAM-3/CD50豬細(xì)胞間粘附分子3規(guī)格：48T/96T

鹽酸奧昔布寧（標(biāo)準(zhǔn)品）Oxybutynin HCl質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定  猴胰島素(INS)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyInsulin,INSELISAKit 96T/48T  HumanEpithelialneuophilactivatingpeptide78,ENA-78ELISAKit人上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

奧扎格雷（標(biāo)準(zhǔn)品）Ozagrel質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定  犬甲狀旁腺激素(PTH)試劑盒 Canine Parathyroid hormone,PTH ELISA Kit  人銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

芐達(dá)賴氨酸Bendazac L-lysine質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR  英文名稱HumanAngiogeninELISAKit人血管生長(zhǎng)素(Angiogenin)規(guī)格：96T/48T  豬白血病抑制因子受體(LIFR)試劑盒 Porcine leukemia inhibitory factor receptor,LIFR ELISA Kit

1酸三丁酯(CP)Tributyl phosphate質(zhì)量規(guī)格：CP  英文名稱RatAngiogeninELISAKit大鼠血管生長(zhǎng)素(Angiogenin)規(guī)格：96T/48T  人白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ )ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

1酸三丁酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Tributyl phosphate質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品  果菜比色法定量檢測(cè)試劑盒20  兔子狀瘤病毒16型衣殼蛋白L1抗體(IgG)試劑盒 Rabbit papillomavirus type 16 L1-capsids aibody(IgG)ELISA Kit

3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 常春藤配基- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷V質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  ELISAKitNOS人合成酶規(guī)格：48T/96T  生長(zhǎng)激素(GH)ELISA試劑盒 ，英文名： GH ELISA Kit

D-果糖-6-1酸二鈉鹽D-Fructose-6-phosphate di salt質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR  小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒 ，英文名： MMP-7 ELISA Kit  PorcineEpithelialgrowthfactor,EGFELISA試劑盒豬表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T