1.售前須知:
1. SK-BR-3細(xì)胞從冷凍保存中恢復(fù)的速度可能很慢。SK-BR-3細(xì)胞在低溫保存恢復(fù)過程中的附著會很輕。這很正常。這種細(xì)胞系在培養(yǎng)的整個周以及每次繼代培養(yǎng)后都表現(xiàn)出松散的附著和漂浮的細(xì)胞,這并不少見; 2. 如果存在大量漂浮物,尤其是在生長的周,在啟動復(fù)蘇后幾天內(nèi)保持細(xì)胞不受干擾。如果仍然有很多漂浮物,用臺盼藍(lán)檢查生存能力。通過輕輕離心保留漂浮細(xì)胞,并在更換培養(yǎng)基時將其與附著的細(xì)胞一起添加回同一培養(yǎng)容器中,這一點很重要。不要分離或丟棄漂浮細(xì)胞。細(xì)胞最初以小斑塊或細(xì)胞群的形式附著,許多細(xì)胞團(tuán)仍處于懸浮狀態(tài)。幾天后,生長將從貼壁細(xì)胞群向外延伸。通常也會出現(xiàn)一些細(xì)胞碎片。漂浮細(xì)胞應(yīng)始終通過溫和離心(125 x g,持續(xù)5至7分鐘)保留,并在換液或傳代后放回培養(yǎng)容器; 3. SK-BR-3細(xì)胞傾向于相互堆積。在細(xì)胞達(dá)到70-80%匯合度之前不要用胰酶消化處理細(xì)胞。如果讓細(xì)胞過度生長,細(xì)胞就會分離漂浮。
2.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡稱 SK-BR-3 [SKBR3]
細(xì)胞別稱 SK-Br-3; Sk-Br-3; SK BR 03; SKBR-3; SKBr-3; SK-BR3; SKBr3; SkBr3;SKBR3
細(xì)胞背景描述 SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞是由Trempe·G和Old·L·J于1970年從一位43歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離得到的。SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)特征包括微絲和橋粒、肝糖原顆粒、大溶酶體、成束的細(xì)胞質(zhì)纖絲;SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞過表達(dá)HER2/cerb-2基因產(chǎn)物。供體年齡 女;43歲
組織來源 乳腺;乳房;肋膜滲出液轉(zhuǎn)移灶
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 乳腺癌細(xì)胞
生長特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級 1
3.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 McCoy’s 5A(PM150710)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
4.傳代方法:
傳代步驟 1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時間 3~5分鐘
傳代比例(密度) 1:2-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時間 ~48-72 hours
本產(chǎn)品僅供科研使用。不能用于人和動物治療等其它臨床診斷使用!以實際收貨產(chǎn)品說明書為準(zhǔn),網(wǎng)站說明書僅供參考。