1.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡(jiǎn)稱 LS 174T [LS174T]
細(xì)胞別稱 Ls174T; LS174t; Ls-174-T; LS-174-T; LS 174 T; LS-174T; Ls-174T; LS 174T;LS-174; LS174
細(xì)胞背景描述 LS 174T細(xì)胞是LS 180細(xì)胞的胰蛋白酶化變種。LS 174T細(xì)胞比親本更易傳代,像LS 180細(xì)胞一樣生成大量的癌胚抗原(CEA)。電鏡研究表明,LS 174T細(xì)胞有豐富的微絲和細(xì)胞質(zhì)粘液素液泡。LS 174T細(xì)胞直腸抗原3陽(yáng)性;p53抗原表達(dá)陰性,但mRNA表達(dá)陽(yáng)性。LS 174T細(xì)胞角蛋白染色陽(yáng)性;LS 174T細(xì)胞癌基因c-myc、N-myc、H-ras、N-ras、Myb和fos的表達(dá)呈陽(yáng)性;癌基因kras和sis的表達(dá)未做檢測(cè)。
供體年齡 女;58歲
組織來(lái)源 直腸;結(jié)直腸腺癌
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 腸癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級(jí) 1
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 MEM(ATCC改良)(PM150467)+10% FBS(164210-50)+1%
P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
3.傳代方法:
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時(shí)間 2~3分鐘
傳代比例(密度) 1:2-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~30-40 hour
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