H22小鼠肝癌細胞
產(chǎn)品基本信息
細胞名稱：H22小鼠肝癌細胞
種屬來源：小鼠
組織來源：肝臟
細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣
生長特性：懸浮生長
培養(yǎng)基:：90%RPMI-1640+10%FBS
生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃
傳代方法：1:2至1:3，每周 3次
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存
支原體檢測：無
注：該細胞長得較快，需保證細胞營養(yǎng)充足，營養(yǎng)不足細胞培養(yǎng)液顏色變黃細胞容易死亡。建議每天換液。
細胞培養(yǎng)操作
1)復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3
min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4
mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，然后進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量對應加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2.
仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。
3.
用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900
rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6.
建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代
。
9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。
懸浮細胞收貨注意事項：
1、收貨時需鏡下拍照(看密度、狀態(tài))
2、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)
a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng)
b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度
c.如密度90%，建議傳代
3、換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(使細胞沉到瓶底);收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤洗瓶底并收集!離心轉速為1000rpm，5min。
關鍵字： H22小鼠肝癌細胞;H22;H22細胞;
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