1.售前須知：

1. 細(xì)胞貼壁慢特別是剛復(fù)蘇時(shí)，一般兩到三天貼壁展開(kāi)，會(huì)有空泡； 2. 細(xì)胞在傳代細(xì)胞中注意消散，不然難貼壁； 3. 成團(tuán)生長(zhǎng)，細(xì)胞密度越大，表面空泡黑點(diǎn)越多；4. 一般細(xì)胞長(zhǎng)至80%傳代，細(xì)胞成片，其實(shí)密度很大； 5. 細(xì)胞生長(zhǎng)太滿對(duì)細(xì)胞狀態(tài)影響嚴(yán)重，傳代后易碎，死亡； 6. 細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間越久，消化難度也會(huì)隨之增加；消化到輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊細(xì)胞可以滑落的時(shí)候可以終止。

2.細(xì)胞起源：

細(xì)胞簡(jiǎn)稱 Caco-2

細(xì)胞別稱 CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2;Caco-2/ATCC細(xì)胞背景描述 Caco-2細(xì)胞分離自直腸原位癌；當(dāng)長(zhǎng)到滿時(shí)，Caco-2細(xì)胞表現(xiàn)出特征性的腸上皮細(xì)胞分化。Caco-2細(xì)胞表達(dá)維甲酸結(jié)合蛋白I和維甲酸

結(jié)合蛋白Ⅱ，并呈角質(zhì)蛋白陽(yáng)性。

供體年齡 男；72歲

組織來(lái)源 結(jié)腸，結(jié)直腸腺癌

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 腸癌細(xì)胞

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

生物安全等級(jí) 1

3.培養(yǎng)及保藏：

完全培養(yǎng)基 MEM（含NEAA）(PM150410)＋20% FBS(164210-50)＋1%P/S(PB180120)

培養(yǎng)環(huán)境 空氣，95%；CO 2，5%

37℃

凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

液氮

4.傳代方法：

傳代步驟 1、吸出原培養(yǎng)液；

2、加入2ml左右PBS，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄；

3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞；

4、放入培養(yǎng)箱消化，顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；

5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液；

6、收集細(xì)胞懸液離心，1200rpm/min 3分鐘，離心完吸出上清丟棄；

7、加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞即可，按比例接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。

消化時(shí)間 3~5分鐘

傳代比例（密度） 1:3-1:4

換液頻次 2~3次/周

倍增時(shí)間 ~60-80 hours