PKH26熒光細胞連接試劑盒采用采用本公司專利膜標記技術，能夠將帶有較長脂質尾巴的黃色-橙色熒光染料結合到細胞膜脂質區(qū)域上。染色方式依賴于細胞與膜的類型，主要用于細胞體外標記、體外細胞增殖研究及體內外細胞示蹤研究。試劑盒中提供染色過程中所需的溶劑（稀釋液C），該溶劑可以可以在染色過程中，增加染料溶解度和染色效率，同時維持細胞活力。稀釋液C與哺乳動物細胞等滲，且不含去垢劑或有機溶劑，也不含生理鹽水和緩沖鹽。根據細胞類型及標記后細胞膜內在的變化，標記后的細胞表面會由均一透亮變得有點狀凸起或補丁狀。但在生理范圍內，PKH26熒光不受pH的影響，每個細胞的熒光強度與染料標記位置無關。

PKH26熒光在黃色-橙色區(qū)域（λex=551 nm,  λem=567 nm），可用來標記追蹤體內外多種細胞。在細胞毒性分析，熒光蛋白、抗體或DNA染料在該區(qū)域發(fā)出的紫色、綠色、紅色和遠紅外等，不會與PKH26產生干擾。PKH26最常被用于基于染料稀釋增殖的分析的染料稀釋應用，包括建立抗原特異性前體頻譜和正?；蚰[瘤組織中靜止或緩慢干細胞或祖細胞的鑒定。同時PKH26也可用于監(jiān)測外來病毒、血小板和其他納米顆粒的攝入；干細胞分裂過程中膜的分配；細胞-細胞之間膜的轉移；細胞吞噬作用；抗原呈遞；粘附；通過間隙連接的信號傳遞；以及組織切片中的神經元遷移。PKH26熒光穩(wěn)定性很強，特別是標記的細胞的研究周期超過一周時PKH26被用于體內細胞追蹤研究。

注意事項：

● 染料的工作液隨用隨配，不要將配好的染料貯存，影響染?效果。

●PKH26染色過程中，不能存在疊氮化物或代謝毒性物。

●雖然貼壁細胞也可以染色，但為獲得均勻染色，單細胞懸液。因此用蛋白酶（trypsin/EDTA）將貼壁細胞消化成單個懸浮細胞后再染色效果更佳。

●染色前去除血清和脂質以提高染色效果。

●鹽的存在會導致染料形成顆粒，干擾染色反應。因此，加染料前細胞重新懸置是很重要的。染料應直接加到細胞懸液中，而不是加到細胞團上。

● 過度的細胞標記將導致膜完整性喪失、細胞數量下降。本樣品細胞和染料濃度是參照濃度適合大部分細胞，但染料/細胞由使用者根據細胞類型和實驗目的決定，另外使用者還要評估細胞的生存力（排碘），熒光強度，熒光峰值的變異系數，染色的均勻性。

● 染?濃度根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少?異。不同的細胞種類標記后可以?蹤的代次或時間差異較?，請根據實際情況或參考?獻進?檢測。

操作注意：快速均勻的混合對標記非常重要，為獲得效果應采取下述措施：
1） 混合時細胞懸液和工作染液應等量；
2） 避免染太多(>5ml)或太少（<100ul）的液體。避免用沾血清的移液管加染料；
3） 液體量應盡可能精確以保證細胞和染料濃度被精確復制。
4）染料和稀釋液作用于細胞的時間盡量短，有一定毒性?？捎孟♂屢喊瓷鲜霾襟E作用于細胞看其受損程度。
5） 加等量血清終止反應，在終止染色反應前別離心稀釋液C中的細胞，清洗時用含血清培養(yǎng)基可增加清洗效果。
6） 細胞應單獨移至新試管中離心，清洗3次時不用稀釋液C而用培養(yǎng)基。
7） 可用于體外干細胞、淋巴細胞、單核細胞、內皮細胞等的標記較理想。
8） 全細胞標記應先于單抗染色的標記，當4℃單抗染色時細胞跟蹤探針將保持穩(wěn)定；如后于單抗染色的標記，很可能出現(xiàn)“蓋帽”現(xiàn)象。
9） 染色細胞用2%多聚甲醛固定穩(wěn)定性達3w以上。

所需材料：

均勻的單細胞懸液；含血清培養(yǎng)基；無血清培養(yǎng)基或不含Ca2+Mg2+的PBS液；血清、白蛋白或與培養(yǎng)基兼容的蛋白源；聚丙烯錐形離心管；溫度可控的離心機（0-1000g）；熒光分析儀（熒光計，熒光顯微鏡，流式細胞儀，熒光圖象分析儀）；超凈臺；細胞計數儀；載玻片。

操作步驟：