DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型）使用說(shuō)明書(shū)
（貨號(hào)：WLB8201KIT）
原理概述：
本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下，侵入雙鏈DNA模板；在侵入位點(diǎn)形成D-loop區(qū)域，并開(kāi)始對(duì)DNA雙鏈進(jìn)行掃描；待找到與引物互補(bǔ)的目的區(qū)域后，復(fù)合體Rec/ssDNA解體的同時(shí)，聚合酶也結(jié)合到引物的3’末端，開(kāi)始鏈的延伸。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短（僅需30 mins）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。使用金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應(yīng)操作，無(wú)需購(gòu)買(mǎi)PCR儀等價(jià)格高昂的設(shè)備。
引物設(shè)計(jì)：
建議使用長(zhǎng)度在30-35 bp的引物，引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度；引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；擴(kuò)增子長(zhǎng)度建議在150-300 bp，通常不超過(guò)500 bp。
試劑盒組成：
組成 | 含量 |
A buffer | 1.6 mL×1管 |
B buffer | 150 μL×1管 |
正對(duì)照模板 | 30 μL×1管 |
正對(duì)照引物Mix | 60 μL×1管 |
試劑 | 48份 |
使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
試劑盒儲(chǔ)存：
運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸；
儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓和反復(fù)凍融；
產(chǎn)品有效期：14個(gè)月。
操作步驟：提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。
1) 每個(gè)干粉反應(yīng)管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混勻，否則會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)效果產(chǎn)生影響）；
2) 每個(gè)反應(yīng)管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物濃度10 μM，對(duì)于多個(gè)反應(yīng)、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應(yīng)管中）；
3) 向反應(yīng)管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根據(jù)核酸濃度調(diào)整加入的核酸模板體積，并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為14.1 μL）;
4) 最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（請(qǐng)務(wù)必上下顛倒甩動(dòng)反應(yīng)管8-10次進(jìn)行混勻；對(duì)于多個(gè)反應(yīng)，建議將B buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè)上下顛倒后混勻）；
5) 混勻后，將反應(yīng)液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應(yīng)管放入恒溫設(shè)備中37-39 oC孵育30 mins；
6) 反應(yīng)結(jié)束后，加入50 μL酚/氯仿，1:1抽提反應(yīng)液，12000 rpm離心5 mins，取5 μL上清進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
體系配制
組分 | 體積（μL） |
A buffer | 29.4 |
上游引物(10 μM)* | 2 |
下游引物(10 μM)* | 2 |
ddH2O和DNA模板 | 14.1 |
B buffer | 2.5 |
總體積 | 50 |
*正對(duì)照反應(yīng)單元體系配制：正對(duì)照模板加入2μL，加入4 μL正對(duì)照引物Mix（包含上/下游引物），其他組分參照體系配制。
注意事項(xiàng)：
1． 由于試劑盒靈敏度非常高，在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免核酸污染，并設(shè)置空白對(duì)照；
2． 使用時(shí)請(qǐng)取出實(shí)驗(yàn)所需的MIRA反應(yīng)單元的數(shù)量，剩余部分請(qǐng)置于存儲(chǔ)條件下。
相關(guān)產(chǎn)品：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 目錄價(jià)格 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型） | WLB8201KIT | 48份/盒 | 2400 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型） | WLE8202KIT | 48份/盒 | 2400 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型） | WLN8203KIT | 48份/盒 | 2400 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型） | WLRN8206KIT | 48份/盒 | 2500 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型） | WLRB8204KIT | 48份/盒 | 2500 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型） | WLRE8205KIT | 48份/盒 | 2500 |
HybriDetect試紙條 | WLFS8201 | 50條/包 | 1650 |
關(guān)鍵字： amp-futrue，DNA恒溫快速擴(kuò)增;
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