產(chǎn)品簡介

DAPI，即4’,6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚二鹽酸鹽，4’,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分子式為C₁₆H₁₅N₅·2HCl，分子量為350.25，CAS號(hào)28718-90-3。

DAPI是一種常用的可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光核酸染料，和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB（ethidium bromide）相比，DAPI對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI的更大激發(fā)波長為340 nm，更大發(fā)射波長為488 nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，更大激發(fā)波長為358 nm，更大發(fā)射波長為461 nm。DAPI也可對(duì)RNA進(jìn)行染色，染色機(jī)理是其可以選擇性嵌入“AU序列”并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA (Ex/Em=358 nm/461 nm)，DAPI-RNA具有較長的更大發(fā)射波長（500 nm），其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜，但可以通過提高濃度使之進(jìn)入活細(xì)胞。

DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測(cè)酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI典型的藍(lán)色熒光特性使其非常普遍的搭配其他綠色、黃色或紅色熒光染料用于細(xì)胞生物學(xué)多色熒光標(biāo)記技術(shù)，因此也常作為核酸和染色體的復(fù)染劑用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)、RNA原位雜交、直接或間接免疫檢測(cè)等領(lǐng)域，其染色后可用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

本產(chǎn)品為溶液，分為2種形式，濃度為5 mg/mL和即用型，即用型產(chǎn)品可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。5 mg/mL DAPI需稀釋后使用。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的DAPI工作濃度為0.5-10 μg/mL。

保存條件

冰袋運(yùn)輸，-20oC避光保存，至少1年有效。

注意事項(xiàng)

1．DAPI對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2．熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

3．為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4．低濃度的DAPI不容易穿透細(xì)胞膜。

5．本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷和治療，不得用于食品和藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

6．為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明

對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI染色。

1．配制工作液：用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作的濃度（0.5-10 μg/mL）。

2．對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入樣本體積3倍的染色液，混勻。

3．室溫放置3-5 min。

4．吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5 min。

5．直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長360 nm，發(fā)射波長460 nm。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。