游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測(cè)血清、動(dòng)物組織、微生物、細(xì)胞）
分光光度法50管/48樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測(cè)血清、動(dòng)物組織、微生物、細(xì)胞）測(cè)定意義：
游離脂肪酸，也稱為非酯化脂肪酸，在與白蛋白結(jié)合的血漿中循環(huán)。動(dòng)物血液中的游離脂肪酸 (FFA )含量是一項(xiàng)重要的生理生化指標(biāo)。血清中游離脂肪酸的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān)，游離脂肪酸的濃度會(huì)因?yàn)樘悄虿?、重癥肝障礙、甲狀腺功能亢進(jìn)等疾病而上升。
測(cè)定原理：
用有機(jī)溶劑萃取FFA。含有FFA的有機(jī)液與三乙醇胺銅反應(yīng),在有機(jī)相中形成脂肪酸銅 (銅皂) FFA一Cu。Cu離子與顯色液反應(yīng)形成紫紅色絡(luò)合物。反應(yīng)形成的顏色深淺與Cu離子濃度的關(guān)系符合朗伯一比爾定律，因此可利用此反應(yīng)進(jìn)行比色。
自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
萃取液：液體 60 mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體 8 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體 8 mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，室溫保存；
試劑四：液體18 mL×1瓶，4℃保存；
樣本前處理：
1.動(dòng)物組織：按照動(dòng)物組織質(zhì)量（g）：萃取液mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL萃取液），進(jìn)行冰浴勻漿。震蕩提取15min，5000 rpm 4℃離心5min，取有機(jī)相待測(cè)。
2.血清：吸取50 μL血清樣本，加入1 mL萃取液，震蕩提取15 min后，4℃，5000 rpm離心5 min，取有機(jī)相待測(cè)。
3.微生物、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：萃取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1 mL萃取液）加入萃取液，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲2秒，間隔3秒，總時(shí)間3min）；震蕩提取15 min，然后5000 rpm 4℃離心5min，取有機(jī)相待測(cè)。
注意：有機(jī)相待測(cè)液可能存在于上層，也可能存在于下層，注意觀察，體積較多的那一層即為有機(jī)相待測(cè)液。
游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測(cè)血清、動(dòng)物組織、微生物、細(xì)胞）測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至550 nm。
2、 工作液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑一（V）：試劑二（V）：試劑三（m）=1（mL）1（mL）：0.66（g）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，在空瓶中配制，試劑盒中帶有4個(gè)空
瓶，先將試劑一與試劑二混合，最后再加入試劑三粉劑）
3、測(cè)定管：吸取750μL樣本，加入250μL工作液，蓋緊后震蕩20 min，4℃，5000 rpm離心5 min，分層后取600μL上層有機(jī)相，加入300μL試劑四，搖勻，10 min后于玻璃比色皿中測(cè)定550 nm的吸光值，記為A測(cè)定。
4、空白管：吸取750μL萃取液，加入250μL工作液，蓋緊后震蕩20 min，4℃，5000 rpm離心5 min，分層后取600μL上層有機(jī)相，加入300μL試劑四，搖勻，10 min后于玻璃比色皿中測(cè)定550 nm的吸光值，記為A測(cè)定?？瞻坠苤恍铚y(cè)一次。
空白管只需測(cè)一次。△A=A測(cè)定-A空白
注意：1、有機(jī)溶劑易揮發(fā)，加入比色皿后應(yīng)盡快檢測(cè)。
2、測(cè)定管中加入的樣本即樣本前處理中的有機(jī)相待測(cè)液。
FFA含量計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0322x - 0.0141 R2 = 0.9985 x：棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL）
y：吸光值差值△A
1、血清FFA含量計(jì)算：
FFA含量(μmol/mL)=(△A+0.0141)÷0.0322×V1÷(V3×V1÷V2)÷1000
=0.621×(△A+0.0141)
2、動(dòng)物組織、微生物、細(xì)胞中FFA含量計(jì)算：
（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
FFA含量(μmol/g鮮重)=(△A+0.0141)÷0.0322×V1÷（W× V1÷V2）÷1000
=0.031×(△A+0.0141)÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
FFA含量(μmo/mg prot)= (△A+0.0141)÷0.0322×V1÷(V1×Cpr)÷1000
=0.031×(△A+0.0141)÷Cpr
V1：加入樣本體積，0.75 mL；V2：萃取液體積，1mL；V3：加入血清（漿）體積，0.05 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：動(dòng)物組織樣品質(zhì)量，g； 1000：1 μmol=1000 nmol 。
注意事項(xiàng)：
蛋白含量不可直接用萃取液提取的有機(jī)相待測(cè)液直接測(cè)定，可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公司的BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒。
最低檢出限為10 nmol/mL。
關(guān)鍵字： 游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測(cè)血清、;游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測(cè)血清、;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員好評(píng)，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。