脂肪酶（Lipase，LPS）活性試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
脂肪酶（Lipase，LPS）活性試劑盒測(cè)定意義：
LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。
測(cè)定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算LPS活性。
自備儀器和用品：
研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、甲苯100mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體90mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體14mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
試劑三：甲苯100mL×1瓶，4℃保存（自備）。
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體10μL×1瓶，10 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。
脂肪酶（Lipase，LPS）活性試劑盒粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后12000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體: 直接檢測(cè)。
LPS測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到710 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min以上。
2. 在5mL EP管中依次加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 空白管 | 測(cè)定管 |
蒸餾水 | 375 |
|
樣本 |
| 125 |
試劑一 | 750 | 750 |
試劑二 |
| 250 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min
37℃振蕩反應(yīng)10 min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液
試劑名稱（μL） | 空白管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
上清液 | 1200 | 1200 |
|
標(biāo)準(zhǔn)品 |
|
| 1200 |
試劑四 | 300 | 300 | 300 |
37℃振蕩反應(yīng)5 min后，靜置5min，取800μL上層液加入1 mL玻璃比色皿，于710nm處測(cè)定吸光值。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
LPS活性計(jì)算公式：
1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷W
（3）按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷細(xì)胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol /min/mL) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]
C標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，2mL；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.125mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。
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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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