酰基轉(zhuǎn)移酶（alcohol acyl transferase，AAT）活性測定試劑盒說明書
分光光度法25管/24樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
酰基轉(zhuǎn)移酶（alcohol acyl transferase，AAT）活性測定試劑盒測定意義：
AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去?；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號傳導(dǎo)中具有重要作用。
測定原理：
AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙?；蕉〈?，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計(jì)算AAT活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
試劑組成和配制：
提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。
試劑三：粉劑×1支，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
?；D(zhuǎn)移酶（alcohol acyl transferase，AAT）活性測定試劑盒AAT測定操作：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入22.5mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇1.25mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入50μL提取液和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入50μL樣本和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管?！?/span>A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。
AAT活性計(jì)算公式：
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T = 98.04×△A÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（×d）×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
= 98.04×△A÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /mL) = △A ÷（×d）×V反總÷V樣÷T =98.04×△A
：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，15 min。
關(guān)鍵字： ?；D(zhuǎn)移酶（alcohol acyl t;酰基轉(zhuǎn)移酶（alcohol acyl t;
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