果糖（fructose ，FT）含量試劑盒說明書

                                分光光度法50管/48樣

注   意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

果糖（fructose ，F(xiàn)T）含量試劑盒測定意義：

果糖是一種最為常見的己酮糖，是葡萄糖的同分異構(gòu)體，以游離狀態(tài)大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中，能與葡萄糖結(jié)合生成蔗糖。果糖是最甜的單糖，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健品生產(chǎn)中。

還原糖含量試劑盒測定原理：

果糖與間苯二酚反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，在480nm下有特征吸收峰。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、蒸餾水

試劑的組成和配制

還原糖含量試劑盒說明書  

                                  分光光度法50管/24樣

注   意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

還原糖含量試劑盒測定意義：

還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。植物體內(nèi)的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等，是最常見的單糖和雙糖，其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物，也是進一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。

測定原理：

加熱促進堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征吸收峰；在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖含量與540nm吸光度成線性關(guān)系，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出樣品中還原糖的量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：15mL×1瓶 ，4℃保存；

樣品中還原糖的提取：

1、細(xì)菌或細(xì)胞的處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入2mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復(fù)30次），轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。

2、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g組織，加入2mL試劑一），冰浴勻漿，轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。

3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.2mL血清（漿）加入2mL試劑一），冰浴勻漿，轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。

測定步驟：

1、 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。

3、 在EP管中加入下列試劑：

將各管搖勻，在95℃水浴中加熱5min（蓋緊，防止水分散失），取出后立即冷卻至室溫，混勻。在540nm波長下讀取對照管和測定管吸光值。計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設(shè)一個對照管。

注意：如果ΔA大于2，需要將樣本用試劑一稀釋，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)（若顯色后出現(xiàn)分層現(xiàn)象，可改用蒸餾水稀釋）。

還原糖含量計算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 8.3796x- 0.3034；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按樣本鮮重計算：

還原糖(μg/g鮮重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W

3、按樣本蛋白濃度計算：

還原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr

4、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

還原糖(μg /10⁴ cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（1000×V1÷V2）=0.239×(ΔA＋0.3034)

5、按血清（漿）體積計算：

還原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（V3×V1÷V2）=1193.4×(ΔA＋0.3034) 

1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入樣本體積，0.7mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿體積），0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，1000萬。

注意：最低檢測限為1mg/g鮮重或10μg/mg p

：

提取液：液體 100ml×1瓶，4℃保存；

試劑一：1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體 40ml×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體 15ml×1瓶，4℃避光保存；

試劑四：粉劑0.5g×1瓶，常溫保存。

果糖提?。?/span>

稱取0.1~0.2g樣本，常溫研碎；加入1mL提取液，適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中；置于80℃水浴鍋中10min（蓋緊，以防止水分散失），振蕩3~5次，冷卻后，4000g，25℃離心10min，取上清；加入少量（約2mg）試劑四，80℃脫色30min（蓋緊，以防止水分散失）；再加入1mL提取液，4000g，25℃離心10min，取上清液測定。

果糖（fructose ，F(xiàn)T）含量試劑盒測定步驟：

1、 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至480nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定（在1.5mL EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，95℃水浴反應(yīng)30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后測定480nm處光吸收值，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管分別記為A1、A2和A3。

果糖含量計算：

1、果糖含量（mg/mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)管×V1）×(A3－A1)÷(A2－A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷（A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行測定蛋白濃度。

2、果糖含量(mg/g鮮重）=（C標(biāo)準(zhǔn)管×V1）×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= 2× (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。

C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，2mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：最低檢測限為100ng/g鮮重或1ng/mg