漆酶（Laccase）試劑盒說明書
分光光度法50管/24樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
漆酶（Laccase）試劑盒測定意義：
漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強(qiáng)的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。
測定原理：
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計(jì)算得漆酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
工作液：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨用前加25mL試劑一溶解；用不完的試劑4℃保存一周。
酶液提取：
1． 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心30min，取上清，置冰上待測。
2． 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
3． 培養(yǎng)液：直接檢測。
漆酶（Laccase）試劑盒測定操作表：
| 對(duì)照管 | 測定管 |
樣本（μL） | 150 | 150 |
試劑一（μL） | 850 |
|
工作液（μL） |
| 850 |
60℃水浴20min后冷卻至室溫，取上清液測定420nm處吸光值A，△A=A測定管-A對(duì)照管 |
注意：
1、 極少數(shù)樣本在60℃水浴20min后會(huì)出現(xiàn)沉淀，可經(jīng)過8000g 25℃離心10min后，取上清檢測，例如成
熟的水稻葉片樣本。
2、 為確保檢測準(zhǔn)確性，若ΔA大于2，將樣本用提取液稀釋2~10倍后重新檢測，計(jì)算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
酶活性計(jì)算公式
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 9.26×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/104 cell）= ×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /L）= ×V反總÷V樣÷T= 9260×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.15mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min
關(guān)鍵字： 漆酶（Laccase）試劑盒;漆酶（Laccase）試劑盒;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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