忍冬藤染料法PCR鑒定試劑盒

價(jià)格	￥3980
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發(fā)貨地	上海
更新日期	2024-11-01

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產(chǎn)品詳情

中文名稱:忍冬藤染料法PCR鑒定試劑盒	英文名稱:Caulis lonicerae
保存條件: -20度	產(chǎn)品類別: PCR試劑盒

【忍冬藤染料法PCR鑒定試劑盒利用PCR原理，定性檢測(cè)病毒，對(duì)病毒引起的疾病診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。

【檢驗(yàn)原理】

利用離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜提取RNA，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以RNA為模板，以引物為起點(diǎn)合成與RNA模板互補(bǔ)的cDNA鏈。在TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異DNA片段的拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過35次循環(huán)，最終使擴(kuò)增DNA片段放大了數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增DNA片段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后，在紫外燈照射下，肉眼可見到DNA片段的擴(kuò)增帶。

【主要組成成份】

組成	50T/盒
PPRV RT-PCR反應(yīng)液	750 μL×1管
PPRV 混合酶液	150 μL×1管
PPRV 陽性對(duì)照	40 μL×1管
PPRV 陰性對(duì)照	40 μL×1管
說明書	1份

注：陰性對(duì)照為基因組DNA，陽性對(duì)照為失去活性的貓冠狀病毒cDNA。

【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。

【需自備的物品】PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀、可調(diào)移液器、瓊脂糖等相關(guān)試劑及設(shè)備。

【注意事項(xiàng)】

1.病毒具有很強(qiáng)的感染能力，操作前必須準(zhǔn)備好各種防御措施。

2.操作時(shí)須嚴(yán)格按照步驟進(jìn)行，廢物必須放入含消毒液的廢物缸，以免污染實(shí)驗(yàn)室和工作人員。

3.為避免其他核酸的污染而出現(xiàn)假陽性，必須使用不含DNA和RNA的離心管、吸管、槍頭、試劑和手套，操作人員須戴口罩。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

如果是提取病毒RNA，請(qǐng)選用RNase free Tip槍頭和1.5 ml離心管或?qū)岊^和離心管用0.1% DEPC水處理后再使用。

【忍冬藤染料法PCR鑒定試劑盒操作步驟】

1.樣品處理

(1). 適用標(biāo)本類型：發(fā)病動(dòng)物血液、空腸及小腸腸內(nèi)容物及組織臟器(腸道組織、腸系膜及淋巴結(jié)等)和病毒培養(yǎng)液。

(2). 標(biāo)本采集，方法如下：

a.血清：用一次性注射器取靜脈血2-3ml，轉(zhuǎn)至5ml 的干燥管中，密閉送檢。

b.腸內(nèi)容物：無菌條件下取腸道內(nèi)容物約1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理鹽水)的5ml 離心管中，立即送檢。

c.組織臟器：取發(fā)病動(dòng)物腸道組織及腸系膜淋巴結(jié)等組織約1g，置一1.5ml的潔凈離心管中，密閉送檢。

(3).應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。

(4).標(biāo)本收集后可立即檢測(cè)；若不能立即檢測(cè)，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長(zhǎng)期保存，標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下，避免反復(fù)凍融。

2. 提取過程

用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3. RT-PCR擴(kuò)增

（1）每份總體積20 μL，含15 μL RT-PCR反應(yīng)液（用前混勻），3μL 混合酶液，2 μL模板RNA。

例如：n份樣品，配制n+1份，15×（n+1）RT-PCR反應(yīng)液， 3×（n+1）混合酶液勻后取18 μL分裝成n份，分別加入2 μL模板RNA，作好標(biāo)記。

（2）在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行以下程序：50 ℃ 10 min，94 ℃ 3 min；循環(huán)94℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共35次；再72 ℃延伸7 min。

4. 電泳

稱1.5 g瓊脂糖放于500 mL錐形瓶中，加入1倍TAE電泳緩沖液100 mL（取2 mL 50倍TAE電泳緩沖液，用雙蒸水稀釋至100 mL），于微波爐中熔解，待冷卻至50℃左右再加入50 μL染色液（自備）混勻。在電泳槽內(nèi)放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固后將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入4μL上樣緩沖液（自備）混勻后取10 μL點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠孔中，以110～120V電壓于1倍TAE電泳緩沖液中電泳，紫外燈下觀察結(jié)果。（注：染色液是2000×，上樣緩沖液是6×）

【結(jié)果判定】

陽性對(duì)照出現(xiàn)191 bp擴(kuò)增帶、陰性對(duì)照無帶出現(xiàn)（引物帶除外）時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。被檢樣品出現(xiàn)191 bp擴(kuò)增帶為貓冠狀病毒陽性，否則為陰性。

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關(guān)鍵字：忍冬藤染料法PCR鑒定試劑盒;

公司簡(jiǎn)介

上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員好評(píng)，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。

成立日期	2011-04-17 （14年）	注冊(cè)資本	50.000000萬人民幣
員工人數(shù)	50-100人	年?duì)I業(yè)額	￥ 100萬以內(nèi)
主營(yíng)行業(yè)	抗體,抗體	經(jīng)營(yíng)模式	試劑,定制,試劑,定制

上海雅吉生物科技有限公司

VIP 3年

公司成立：14年
注冊(cè)資本：50.000000萬人民幣
企業(yè)類型：有限責(zé)任公司(自然人投資或控股)
主營(yíng)產(chǎn)品：抗體，細(xì)胞，生物試劑等
公司地址：上海市閔行區(qū)元江路5500號(hào)第 1幢5658室

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