反轉錄(Reverse Transcription)是以RNA為模板,在反轉錄酶的催化作用下,合成RNA/DNA雜合雙鏈,然后水解雜合雙鏈中的RNA,得到互補的單鏈cDNA的過程。得到的cDNA單鏈可以作為擴增模板合成雙鏈DNA。cDNA的合成可以用與后續(xù)的PCR實驗、qPCR實驗、基因檢測、基因工程等各個領域。其中反轉錄酶的選擇對后續(xù)實驗至關重要,經過改造和優(yōu)化,推出了特別適合后續(xù)qPCR實驗的高精確度Q M-MLV反轉錄酶。 Q M-MLV反轉錄酶具有正常的依賴于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性,能夠以RNA或DNA為模板,在引物存在的情況下進行互補DNA鏈的合成,即可以進行cDNA的鏈合成。同時本反轉錄酶還保留了RNase H活性,能選擇性剪切RNA和DNA雜合雙鏈中的RNA,有利于后續(xù)cDNA第二鏈的合成。采用本反轉錄酶,生產了 Q cDNA鏈合成試劑盒,試劑盒包含了進行cDNA鏈合成所需的各種試劑,使用簡單方便快捷。
產品特點:檢測靈敏度高:和其它反轉錄酶相比,本產品的反轉錄產物用于qPCR時,CT值通常能下降1-2左右,使用本產品能獲得更好的檢測靈敏度,可以使用更少的樣品;擴增速度快:使用本產品時,僅需反轉錄5-10分鐘,即可以用于后續(xù)的qPCR,可以大幅縮短實驗時間。反轉錄性能優(yōu),擴增特異性強,反應穩(wěn)定性好
產品用途:1. 總RNA或mRNA后cDNA條鏈的合成,特別適合用于常規(guī)RNA樣品的反轉錄和qPCR檢測或一步法qRT-PCR檢測,也非常適合于內源低豐度RNA、外源病毒RNA等微量RNA的反轉錄及后續(xù)的qPCR檢測;2. 反轉錄產物也適合用于常規(guī)PCR、cDNA的第二鏈合成、cDNA文庫構建、克??;3. DNA探針的熒光、生物素、地高辛或同位素標記;4. 通過引物延伸(primer extension)分析和研究RNA。
產品效果:
圖2.使用 Q cDNA鏈合成試劑盒對總RNA反轉錄后,對于不同長度的cDNA進行PCR擴增后的電泳效果圖。圖中可見本產品可以輕松完成長度為8 kb以下基因的反轉錄,反轉錄的長度可以達到12 kb。圖中的擴增效果僅供參考。
小編貼心為大家整理了不同反轉錄酶的特點,大家可根據(jù)實驗需求進行選擇哦~
選擇指南:1. 如果反轉錄后的用途是qPCR,先推薦選購Q M-MLV反轉錄酶。對于待檢測的目的RNA的豐度比較高的時候,可以適當優(yōu)先考慮II M-MLV反轉錄酶(RNase H-),通常僅需反轉錄10分鐘即可用于qPCR,也可以大幅縮短實驗時間。2. 如果希望克隆一個目的基因,先推薦III M-MLV反轉錄酶(RNase H-),該酶不僅能反轉錄長達12kb的RNA,并且具有快速反轉錄能力,小于3kb的目的基因僅需反轉錄10分鐘,可以大幅縮短實驗時間。用于克隆目的基因時,II M-MLV反轉錄酶(RNase H-)、M-MuLV反轉錄酶和 M-MuLV反轉錄酶(RNase H-)也是比較好的選擇。
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