產(chǎn)品名稱：Hep3B(Hep3B2.1-7)人肝癌細胞
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
Hep3B(Hep3B2.1-7)人肝癌細胞收到后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
Hep3B(Hep3B2.1-7)人肝癌細胞培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
Hep3B(Hep3B2.1-7)人肝癌細胞部分相關(guān)細胞如下：
垂體原代細胞
小腸成纖維原代細胞
前列腺成纖維原代細胞
肝內(nèi)膽管上皮原代細胞
肺巨噬原代細胞
小鼠肝成纖維原代細胞
小鼠神經(jīng)膠質(zhì)原代細胞
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小鼠腎周原代細胞
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小鼠胃粘膜成纖維原代細胞
小鼠心肌內(nèi)皮原代細胞
小鼠主動脈成纖維原代細胞
小鼠子宮上皮原代細胞
骨髓源性肥大原代細胞
自然殺傷T原代細胞
脾臟CD4+T原代細胞
腦動脈血管平滑肌原代細胞
肌衛(wèi)星原代細胞
星形膠質(zhì)原代細胞
脊髓神經(jīng)元
腦微血管內(nèi)皮原代細胞
骨髓間充質(zhì)干原代細胞
脂肪微血管內(nèi)皮原代細胞
前脂肪原代細胞
角質(zhì)形成原代細胞
皮膚成纖維原代細胞
髓核原代細胞
骨骼肌成纖維原代細胞
滑膜成纖維原代細胞
子宮內(nèi)膜上皮原代細胞
輸卵管平滑肌原代細胞
輸卵管上皮原代細胞
卵巢間質(zhì)原代細胞
海綿體平滑肌原代細胞
睪丸支持原代細胞
胸腺原代原代細胞
胸腺原代細胞
肝星狀原代細胞
冠狀動脈內(nèi)皮原代細胞
冠狀動脈平滑肌原代細胞
頸動脈內(nèi)皮原代細胞
頸動脈平滑肌原代細胞
腹腔主動脈平滑肌原代細胞
腹腔主動脈外膜成纖維原代細胞
股動脈內(nèi)皮原代細胞
股動脈平滑肌原代細胞
肺動脈內(nèi)皮原代細胞
肺大動脈平滑肌原代細胞
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氣管上皮原代細胞
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清道夫魚魚唇表皮原代細胞
豬乳腺上皮原代細胞
羊肺微血管內(nèi)皮原代細胞
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關(guān)鍵字： Hep3B(Hep3B2.1-7)人肝癌;Hep3B(Hep3B2.1-7)細胞;
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