細(xì)胞收到后要怎樣處理？

冷凍細(xì)胞解凍程序:

1.根據(jù)細(xì)胞說明書來配置培養(yǎng)基，不同的細(xì)胞株適應(yīng)的培養(yǎng)基不同，請務(wù)必按細(xì)胞需求來配置。

絕大多數(shù)的細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類，所以當(dāng)細(xì)胞換成你們自己的培養(yǎng)基生長狀態(tài)變差或者速度變緩的時(shí)候，不要著急，可以靜養(yǎng)一段時(shí)間。給細(xì)胞一個(gè)適應(yīng)的時(shí)間，不要一日看三回，操之過急；如實(shí)驗(yàn)確實(shí)緊張，可以使用中喬新舟細(xì)胞株完全培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基是按細(xì)胞精心優(yōu)化，種類豐富，適合中喬新舟任意一株細(xì)胞的培養(yǎng)。若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同時(shí)， 請務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞生長適應(yīng)后，方進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對(duì)細(xì)胞而言差異極大，請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞說明書選擇相應(yīng)的血清 ，這點(diǎn)很重要。

細(xì)胞復(fù)蘇的方法：

1.將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫， 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之， 移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

2.取出冷凍管， 立即放入37 °C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿， 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺(tái)。

3.依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺(tái)內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言，1 % 以下的冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍的 細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。

5.對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO ， 去除DMSO的方法如下：可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

活細(xì)胞的處理方式︰

1. 細(xì)胞在寄送過程中，為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。收到后，請檢查flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長和有無污染現(xiàn)象，若有任何問題，不要打開蓋子，請立即通知我們。

2. 將原封的T25 flask細(xì)胞 靜置于細(xì)胞 培養(yǎng)箱中，讓細(xì)胞穩(wěn)定一下，并讓運(yùn)送過程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。2-4小時(shí)后，無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基，僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi)，如無需傳代，請置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，如細(xì)胞已達(dá)到85%以上的密度，請立即將細(xì)胞做傳代處理。