Transwell細胞遷移實驗實驗介紹細胞遷移與侵襲實驗將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酷膜相隔，將研究的細胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酷膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞，應用不司不經(jīng)和經(jīng)過不同外理的聚破酸酷膜，就可以進行共培養(yǎng)，細胞趨化，細胞遷移，細胞侵襲等多種方面的研究。

實驗步驟：

一、材料準備可拍照顯微鏡，Transwell小室，孔徑8um，沒包被膠的(Coster和Corning公司的也較常用)，Transwell遷移實驗的細胞培養(yǎng)板24孔板。細胞培養(yǎng)板應當與購買的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，無血清 DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培養(yǎng)基，DMEM完全培養(yǎng)基，1640完全培養(yǎng)基(也可加到20%血清)，無菌PBS，棉簽，胰酶，甲醇，結(jié)晶紫染液(0.1%(g/ml)PBS結(jié)晶紫)

二、步驟和流程

1.基質(zhì)膠鋪板用BD公司的Matrigel1:8(根據(jù)細胞產(chǎn)生mmp的量來決定)稀釋，包被Transwel小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matriqel聚合成經(jīng)膠。使用前進行基底膜水化。2.2制備細胞縣液1制備細胞縣液前可先讓細胞撒血清饑餓12-24h，進一步去除血清的影響。但這一步并不是必須的。

2.消化細胞，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液，(用PBS洗1-2遍)，用含BSA的無血清培養(yǎng)基重暴。調(diào)整細胞密度至5x105/m。

3.接種細胞1.取細胞縣液100u加入Transwel小室。2.24刊板下室一般加入600ul含20S的培美基，特別注意的是，下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生，一旦產(chǎn)生氣泡，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現(xiàn)氣泡，要將小室提起，去除氣泡，再將小室放進培養(yǎng)板。3.培養(yǎng)細胞:常規(guī)培養(yǎng)12-48h(主要依癌細胞侵襲能力而定)。24h較常見，時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外，處理因素對細胞數(shù)目的影響也不可忽視。4.結(jié)果統(tǒng)計直接計數(shù)法，"貼壁”細胞計數(shù)，這里所謂的“貼壁”是指細胞穿過膜后，可以附著在膜的下室側(cè)而不會掉到下室里面去，通過給細胞染色，可在鏡下計數(shù)細胞。取出Transwell小室，棄去孔中培養(yǎng)液，用無鈣的PBS洗2遍，甲醇固定30分鐘將小室適當風干。0.1%結(jié)晶紫染色20min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細胞，用PBS洗3遍。400倍顯微鏡下隨即五個視野觀察細胞，記數(shù)。