一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱：小鼠巨噬細(xì)胞

細(xì)胞別稱：Ana-1; ANA1

細(xì)胞貨號(hào)：SNL-020

細(xì)胞種屬：小鼠

生長(zhǎng)情況：懸浮

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法：1.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；

2.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

3.補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng)：部分懸浮細(xì)胞會(huì)附著瓶底，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)基或者吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

三、細(xì)胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);

凍存規(guī)格：200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法：

1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；

2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；

3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

注意事項(xiàng)：凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

Tips：

1.細(xì)胞懸浮圓形生長(zhǎng)，偶有小聚團(tuán)，部分細(xì)胞附著瓶底；

2.圓形透亮、細(xì)胞膜完整的細(xì)胞是活細(xì)胞，如果無法判斷，可以取少量細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)確定細(xì)胞活率；

3.懸浮細(xì)胞密度維持1E5-5E5/ml之間，密度過低或者過高可能會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)；

我們推薦使用尚恩生物Ana-1（小鼠巨噬細(xì)胞）專用完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：SNLM-020）作為體外培養(yǎng)Ana-1（小鼠巨噬細(xì)胞）的培養(yǎng)基。