細(xì)胞裂解液Laemmli Buffer（2×）
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。
Laemmli Buffer (2×)是一種經(jīng)典的細(xì)胞裂解液，含有十二烷基硫酸鈉（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS），可以使蛋白變性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)膜性結(jié)構(gòu)的崩解和蛋白的釋放。細(xì)胞裂解液中的蛋白濃度可用 BCA 法測(cè)定，并進(jìn)行 SDS-PAGE 分析，是制備 western blot 樣品的首選細(xì)胞裂解液。
二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。
本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸和保存，有效期 3 年。
三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。
1. 本產(chǎn)品為即用型試劑，與細(xì)胞混勻后，即可裂解細(xì)胞。
2. 本產(chǎn)品含有蛋白變性劑，可以提取細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核及細(xì)胞膜蛋白，提取效率高。
3. 本產(chǎn)品具有 Loading Buffer 的作用，裂解細(xì)胞后可以直接上樣，進(jìn)行 SDS-PAGE 分析。
四、自備試劑。
β-巰基乙醇（β-ME）或二硫蘇糖醇（DTT）。
五、使用說(shuō)明。
1. 細(xì)胞裂解。利用 Laemmli Buffer (2×)裂解細(xì)胞的方式有 2 種，分別是：
1) 胰酶消化法收集貼壁細(xì)胞或離心法收集懸浮細(xì)胞，PBS 洗滌一次，加入與細(xì)胞沉淀等體積的 Laemmli Buffer（2×），混勻，100 ℃煮沸 5 min，冰水混合物中冷卻。
2) 直接裂解。6 孔板培養(yǎng)的細(xì)胞，棄培養(yǎng)液，PBS 洗滌一次，加入 100 μl Laemmli Buffer（2×），混勻，轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 離心管中，100 ℃煮沸 5 min，冰水混合物中冷卻。
2. 離心。12,000 rpm，4 ℃離心 5 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管，即為細(xì)胞裂解液。
3. 蛋白濃度測(cè)定。用 Laemmli Buffer（2×）作為對(duì)照，利用 BCA 法蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定細(xì)胞裂解液中的蛋白濃度，并計(jì)算上樣體積。
4. SDS-PAGE 分析。細(xì)胞裂解液中加入還原劑，如 β-ME（終濃度為 5%）或 DTT（終濃度為 100 mM），混勻，移取適量細(xì)胞裂解液，加入聚丙烯酰胺凝膠，電泳分析。
六、注意事項(xiàng)。
1. 本產(chǎn)品與 Bio-Rad 公司的 Laemmli Buffer (2×)具有同樣的裂解效果和使用方法。
2. 本產(chǎn)品不含還原劑，因而裂解細(xì)胞后可以用 BCA 法測(cè)定蛋白濃度。
3. 本產(chǎn)品會(huì)導(dǎo)致蛋白變性和蛋白復(fù)合物解離，因而本產(chǎn)品制備的細(xì)胞裂解產(chǎn)物不適合做免疫沉淀和蛋白激酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。
4. 請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服、佩戴乳膠手套和安全眼鏡，以避免試劑飛濺導(dǎo)致的皮膚、眼睛或者呼吸道等部位的化學(xué)灼傷。如果不慎接觸了皮膚或者眼睛，請(qǐng)立即用大量水沖洗，必要時(shí)去醫(yī)院護(hù)理。
關(guān)鍵字： 細(xì)胞裂解液;Laemmli Buffer;
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