"MuM-2C:人眼脈絡(luò)黑色素瘤復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關(guān)重要的考驗。很多同學(xué)都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

Jurkat 77細胞類似產(chǎn)品：：QBI-293A細胞、M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細胞、Kupffer細胞

Panc4.03細胞類似產(chǎn)品：：RMG-1細胞、EB2細胞、Melanoma 14細胞

NCI-446細胞類似產(chǎn)品：：RM1細胞、H1522細胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-1細胞

OCI-LY-8細胞類似產(chǎn)品：：SKO007細胞、NCI-H2591細胞、HOP-62細胞

[細胞產(chǎn)品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：脈絡(luò)膜；黑色素瘤

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細胞形態(tài)：上皮細胞樣

NE-4C細胞類似產(chǎn)品：：PK-136細胞、rRMECs細胞、NuTu-19細胞

tdott細胞類似產(chǎn)品：：PANC0813細胞、PC-3M-2B4細胞、U-2932細胞

Human podocyte細胞類似產(chǎn)品：：L(TK-)細胞、ECC12細胞、Daoy細胞

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應(yīng)立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升GAO到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良HAO，當(dāng)補液時，需避免反復(fù)吹打。

HTori3細胞類似產(chǎn)品：：GM637A細胞、MDA330細胞、P30/Ohkubo細胞

CEF細胞類似產(chǎn)品：：Mesothelial cells transfected with pRSV-T 5A細胞、343 MG細胞、MALME 3M細胞

HCC-1171細胞類似產(chǎn)品：：MCF-10A細胞、LNCaP.FGC細胞、FDC-P1細胞

HEMCSS細胞類似產(chǎn)品：：STTG1細胞、SKCO 1細胞、RL95細胞

RH-30細胞類似產(chǎn)品：：IAR-20細胞、SK-N-BE2C細胞、CMT 93細胞

HEY-A8細胞類似產(chǎn)品：：H1395細胞、SNU520細胞、CHO cell clone K1細胞

Hs863T細胞類似產(chǎn)品：：NCIH1836細胞、LC-1細胞、RDES-1細胞

Calu-3細胞類似產(chǎn)品：：H-378細胞、OP-9細胞、Hs 611.T細胞

Walker256-TC細胞類似產(chǎn)品：：WM239細胞、SW-954細胞、HN4細胞

H-2347細胞類似產(chǎn)品：：Anglne細胞、WM-239細胞、TCC Sup細胞

RS411細胞類似產(chǎn)品：：NT2-D1細胞、LAN-5細胞、HEK293-FT細胞

T98細胞類似產(chǎn)品：：SUPB-15細胞、CF PAC-1細胞、MV-4-11細胞

MCF 10A細胞類似產(chǎn)品：：OCI-Ly01細胞、HBdSMC細胞、University of Michigan-Renal Carcinoma-2細胞

MD Anderson-Metastatic Breast-157細胞類似產(chǎn)品：：MDCKII細胞、NCI-HUT-596細胞、SK-ES細胞

F442A細胞類似產(chǎn)品：：TO 175.T細胞、H23細胞、SN12-PM6細胞

SUP-T1細胞類似產(chǎn)品：：N-2a細胞、A-431細胞、SN12C細胞

SUP-T1細胞類似產(chǎn)品：：N-2a細胞、A-431細胞、SN12C細胞

L5178Y細胞類似產(chǎn)品：：Transformed Human Liver Epithelial-3細胞、J774.A1細胞、PL-5細胞

KBM-7細胞類似產(chǎn)品：：KY-50細胞、GS-9L細胞、SK-N-MC細胞

OSC-19細胞類似產(chǎn)品：：BE2_C細胞、MDA 1386細胞、CL 1-0細胞

Tb 1 Lu (NBL-12)細胞類似產(chǎn)品：：VMM-5A細胞、SU-DHL-2細胞、RASMCs細胞

Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細胞類似產(chǎn)品：：H-676B細胞、Centre Antoine Lacassagne-148細胞、RIN-m 14B細胞

GalK1細胞類似產(chǎn)品：：CaEs17細胞、T/G HA VSMC細胞、MB-49細胞

NCI-H2087細胞類似產(chǎn)品：：SW962細胞、2B4細胞、KYSE30細胞

MuM-2C:人眼脈絡(luò)黑色素瘤復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

H-2291細胞類似產(chǎn)品：：SuDHL 4細胞、BCaP-37細胞、HeLa/DDP細胞

IGROV 1細胞類似產(chǎn)品：：HDF-a細胞、NCI-Hut 125細胞、OLN-93細胞

OC316細胞類似產(chǎn)品：：COLO320HSR細胞、WEHI-279細胞、Human Embryo Kidney-2細胞

HET-1A細胞類似產(chǎn)品：：GM3190細胞、Caco2-BBE細胞、LX-2細胞

OVCA-433細胞類似產(chǎn)品：：HOS細胞、NCC-IT細胞、Bowes melanoma cells細胞

BNL CL.2細胞類似產(chǎn)品：：TF1細胞、JURKAT E-6.1細胞、Colo-206F細胞

MGH-U3細胞類似產(chǎn)品：：RC-K8細胞、AR4-2J細胞、PANC1005細胞

HKBML細胞類似產(chǎn)品：：HL-1細胞、8226細胞、SW 962細胞

ARO 81-1細胞類似產(chǎn)品：：FHCRC-11細胞、MV-3細胞、CNE-2Z細胞

N87細胞類似產(chǎn)品：：HDSMC細胞、Th17細胞、L-M(TK-)細胞

CORL88細胞類似產(chǎn)品：：H-1819細胞、Vx2細胞、MESSA/Dx5細胞

RetroPack PT67細胞類似產(chǎn)品：：MAD109細胞、CAL78細胞、T84細胞

HT55細胞類似產(chǎn)品：：SUM 159PT細胞、UM-UC-14細胞、ML-2細胞

WML2細胞類似產(chǎn)品：：UMR-106細胞、BCP1細胞、K7M2細胞

PC-12細胞類似產(chǎn)品：：SW-13細胞、P3X63NS1細胞、KM933細胞

H9c2 (2-1)細胞類似產(chǎn)品：：HT clone H9細胞、SKRC-52細胞、LIPF155C細胞

T-47D細胞類似產(chǎn)品：：149 PT細胞、HT115細胞、BCaP-37細胞

H-1395細胞類似產(chǎn)品：：A549-Taxol細胞、NCI-322細胞、UO-31細胞

SVG p12細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1688細胞、HEP3B2細胞、CAL78細胞

NCIH740細胞類似產(chǎn)品：：95C細胞、NCI-H3255細胞、CCC-HHM-2細胞

MEC1細胞類似產(chǎn)品：：J 111細胞、Rat Chondrosarcoma Swarm細胞、SK Col 1細胞

HTR8細胞類似產(chǎn)品：：JHH2細胞、Farage OL細胞、HDQP1細胞

FRTL 5細胞類似產(chǎn)品：：RAW264細胞、OCI/AML-5細胞、NS1-Ag 4/1細胞

CHP212細胞類似產(chǎn)品：：CTV1細胞、T-98細胞、Farage Original Line細胞

MBdSMC細胞類似產(chǎn)品：：NCIH810細胞、MC3T3-E細胞、HCT.116細胞

PE/CA-PJ34 (clone C12)細胞類似產(chǎn)品：：MOLT 4細胞、Swiss-3T3細胞、H-2087細胞

BetaTC6細胞類似產(chǎn)品：：NIH-OVCAR-3細胞、Hs895.T細胞、A-172細胞

SCC154細胞類似產(chǎn)品：：Plaepi 34細胞、VM-CUB1細胞、BHT101細胞

ETCC-007細胞類似產(chǎn)品：：HEL-92-1-7細胞、UT-7細胞、HCC1187細胞

NCIH1573細胞類似產(chǎn)品：：CT26細胞、KYSE50細胞、MOVAS細胞

Chang Cells細胞類似產(chǎn)品：：Z138細胞、G-361細胞、KYSE450細胞

CG4細胞類似產(chǎn)品：：PaTu 8988s細胞、PLC/PRF/5細胞、HCC1954-BL細胞

MB231細胞類似產(chǎn)品：：MKN 45細胞、KNS-81細胞、NRK 49F細胞

NCI-H441-4細胞類似產(chǎn)品：：H1975細胞、BNL.1ME A.7R.1細胞、Human Corneal Endothelial Cells-12細胞

G-292 clone A141B1細胞類似產(chǎn)品：：EB2細胞、NCIH244細胞、LLC1細胞

PE/CA-PJ-34細胞類似產(chǎn)品：：SK-OV-433細胞、QG-56細胞、HCC-44細胞

SL-1細胞類似產(chǎn)品：：C22 (Clara)細胞、Mouse INsulinoma 6細胞、CHP 100細胞

HCC-1143細胞類似產(chǎn)品：：University of Michigan-Urothelial Carcinoma-3細胞、RPMI #1846細胞、CoC1細胞

GS-9L細胞類似產(chǎn)品：：BC-028細胞、Neukoplast細胞、OAW42細胞

HDSMC細胞類似產(chǎn)品：：LTEPsm細胞、MHH-CALL-2細胞、Kit 225-K6細胞

HcaF細胞類似產(chǎn)品：：H8細胞、YD-15細胞、RT-112細胞

JVM-3細胞類似產(chǎn)品：：KYSE180細胞、HEL92.1.7細胞、Tca8113細胞

MDA330細胞類似產(chǎn)品：：Pt K2細胞、PG [Human lung carcinoma]細胞、ROS-17/2.8細胞

SKRC-20細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2342細胞、JOSK-M細胞、SUM 52細胞

GM346細胞類似產(chǎn)品：：LN 229細胞、HS-766-T細胞、NCI-H2286細胞

BeWo細胞類似產(chǎn)品：：SU-DHL-5細胞、TE-3A細胞、UM-UC-3細胞

COV 434細胞類似產(chǎn)品：：HEK/EBNA細胞、SKNBE2C細胞、HT1197細胞

H4-II-E細胞類似產(chǎn)品：：Hmy.2 CIR細胞、PANC 203細胞、624細胞

SW 962細胞類似產(chǎn)品：：OCI-Ly07細胞、MMAc.SF細胞、SNU-119細胞

BJA-B細胞類似產(chǎn)品：：Y3Ag1.2.3細胞、NE-1細胞、BC-020細胞

COLO679細胞類似產(chǎn)品：：EPC細胞、Hs-940細胞、SCH細胞

H-929細胞類似產(chǎn)品：：C3H/10T1/2 CL8細胞、ZR751細胞、NCI-H661細胞

mIMCD-3細胞類似產(chǎn)品：：NIH:OVCAR4細胞、BJA-B細胞、H1882細胞

TW 01細胞類似產(chǎn)品：：A20細胞、ECC-1細胞、SC細胞

MBMEC細胞類似產(chǎn)品：：CNLMG-B5537SKIN細胞、alphaTC1 Clone 6細胞、UPCI:SCC90細胞

SCC090細胞類似產(chǎn)品：：A673細胞、MOLM13細胞、Lewis Lung細胞

Ocular Choroidal Melanoma-1細胞類似產(chǎn)品：：XuanWei Lung Cancer-05細胞、A375-SM細胞、CHP 212細胞

MOLM16細胞類似產(chǎn)品：：16-HBE14o細胞、CEM-CCRF細胞、HSF細胞

MOLM16細胞類似產(chǎn)品：：16-HBE14o細胞、CEM-CCRF細胞、HSF細胞

8402細胞類似產(chǎn)品：：VMCUB1細胞、BMDC細胞、WM 2664細胞

BE(2)C細胞類似產(chǎn)品：：SUM 149PT細胞、NT2/D1細胞、BALB/c 3T3 clone A31細胞

Daudi細胞類似產(chǎn)品：：SW 837細胞、SK-Mel 1細胞、NKM1細胞

NPC-TW 01細胞類似產(chǎn)品：：SK-OV-3細胞、V79-4細胞、BLO11細胞

786-O RCC細胞類似產(chǎn)品：：SMA 560細胞、Murine Carcinoma-38細胞、VK2/E6E7細胞

EL 4細胞類似產(chǎn)品：：L5178Y細胞、Hs 294T細胞、HuH-28細胞

Hs 695.T細胞類似產(chǎn)品：：HSC6細胞、IBRS-2細胞、CHL-11細胞

HCe-8693細胞類似產(chǎn)品：：MOLM-16細胞、UACC893細胞、OCIAML5細胞

Mink細胞類似產(chǎn)品：：ROS 17/28細胞、SUIT2細胞、Human Microglia Clone 3細胞

HUT-125細胞類似產(chǎn)品：：HEL-92_1_7細胞、hTERT-RPE-1細胞、VeroE6細胞

Mono-Mac-1細胞類似產(chǎn)品：：ssMCF7細胞、ATC241細胞、Normal Rat Kidney細胞

HS-940-T細胞類似產(chǎn)品：：Hs940-T細胞、WILL-2細胞、HSF2細胞

ML-2細胞類似產(chǎn)品：：CAMA細胞、H2452細胞、NCIH508細胞

RSMC細胞類似產(chǎn)品：：SU-DH-L5細胞、TKB1細胞、UWB1.289細胞

SNU-601細胞類似產(chǎn)品：：NT2/D1細胞、PANC-03-27細胞、DSL-6A-C1細胞

DHL6細胞類似產(chǎn)品：：KASUMI6細胞、C22細胞、LM(TK-)細胞

MDA134細胞類似產(chǎn)品：：RBL 1細胞、H-1993細胞、MDCK細胞

U343MG細胞類似產(chǎn)品：：JM-Jurkat細胞、RPMI 1788細胞、U87-MG細胞

CNE2Z細胞類似產(chǎn)品：：LOU-NH-91細胞、COS-1細胞、CNE細胞

RPMI #8226細胞類似產(chǎn)品：：He La細胞、LICR-LON-HN6-R細胞、SKNBE-2細胞

NCIH1155細胞類似產(chǎn)品：：LS 1034細胞、IEC18細胞、Opossum Kidney細胞

Mink細胞類似產(chǎn)品：：ROS 17/28細胞、SUIT2細胞、Human Microglia Clone 3細胞

BT20細胞類似產(chǎn)品：：OV-90細胞、MDAMB361細胞、PANC-04-03細胞

MuM-2C:人眼脈絡(luò)黑色素瘤復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

NALM6細胞類似產(chǎn)品：：Ramos (RA)細胞、IPEC-J2細胞、CTV1細胞

TOV21G細胞類似產(chǎn)品：：Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4細胞、PANC-1細胞、SNU398細胞

AAV293細胞類似產(chǎn)品：：COS1細胞、MLE12細胞、NCIH2171細胞

WM-2664細胞類似產(chǎn)品：：Mahlavu細胞、SNUC2B細胞、MDCK supertube細胞

COLO-320-DM細胞類似產(chǎn)品：：GEO細胞、KYSE-520細胞、SW1353細胞

M059J細胞類似產(chǎn)品：：Reuber-H-35 hepatoma細胞、RPE D407細胞、CFSC-8B細胞

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