"T-HEECs:人正常食管上皮復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

624-mel細胞類似產品：：HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]細胞、aNK細胞、NUGC-2細胞

SKUT-1細胞類似產品：：H-498細胞、Kit225細胞、Ra #1細胞

OCI-AML-3細胞類似產品：：HS-294T細胞、MHCC-97細胞、UMUC3細胞

NCIH548細胞類似產品：：COLO 679細胞、HGC27細胞、NCI-H838細胞

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：食管；上皮細胞；女性

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細胞形態(tài)：上皮細胞樣

BpRc1細胞類似產品：：hTERT-HME1細胞、H1048細胞、IM-9細胞

SK-N-AS細胞類似產品：：FDCP-1細胞、NCI N87細胞、CCRF細胞

BCECs細胞類似產品：：PANC403細胞、MCF-7/ADR-RES細胞、MDA-MB 468細胞

細胞培養(yǎng)實驗基本操作：①進無菌室前要徹底洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用７５%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內的培養(yǎng)液成分如蛋白質等燒焦后會產生有害物質，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產生變形影響使用。③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。⑥操作完畢后應整理HAO工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系的傳代工作應由兩人獨立進行；無菌室的徹底消毒①新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室。使用前應稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比，Zui大的YOU點是便宜，而且可以稀釋５０倍用，而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。②甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉，熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含３７－４０%的甲醛。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良HAO，當補液時，需避免反復吹打。

Hs 746.T細胞類似產品：：SK_N_BE2C細胞、U87 MG細胞、Pt K2 (NBL-5)細胞

Human podocyte細胞類似產品：：L(TK-)細胞、ECC12細胞、Daoy細胞

Glioma-261細胞類似產品：：BHP 10-3細胞、H2141細胞、COLO 205細胞

PC10細胞類似產品：：MIMVEC細胞、BNCL2細胞、NCI-H2106細胞

MHCC97H細胞類似產品：：Melanoma 14細胞、M-O7e細胞、H2030細胞

JURKAT E-6.1細胞類似產品：：MEL細胞、NCIH647細胞、Balb/c3T3細胞

IEC 18細胞類似產品：：H865細胞、alpha-TC1-6細胞、CL-40細胞

YES 2細胞類似產品：：SNU520細胞、Factor Dependent Continuous-Paterson 1細胞、SUM-159細胞

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BRL3A細胞類似產品：：WEHI-164細胞、NTera-2D1細胞、COLO-205細胞

Kasumi 1細胞類似產品：：Nb2-11細胞、PC.3細胞、SK_N_FI細胞

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ECC-12細胞類似產品：：RCC10細胞、SCL1細胞、Lec1細胞

Walker256-TC細胞類似產品：：WM239細胞、SW-954細胞、HN4細胞

Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞類似產品：：EFM19細胞、DHL-2細胞、U937細胞

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H508細胞類似產品：：ADR-RES細胞、U 138 MG細胞、H-1819細胞

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T-HEECs:人正常食管上皮復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

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EB1細胞類似產品：：Colo320細胞、CCFSTTG1細胞、J774A1細胞

NHDF細胞類似產品：：CAL 33細胞、UCLA-SO-M21細胞、D341 Med細胞

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RT4-D6-P2T細胞類似產品：：CAKI.1細胞、H-2196細胞、AR-42J細胞

Lung cancer-1/squamous細胞類似產品：：UM-UC-3細胞、QBC-939細胞、H220細胞

343 MG細胞類似產品：：SUD6細胞、alpha-TC1.6細胞、H-747細胞

T-HEECs:人正常食管上皮復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

NOMO1細胞類似產品：：Keio University-19-19細胞、Evsa T細胞、Kit 225 K6細胞

Clone Y1細胞類似產品：：COR-L23/P細胞、RPE1-hTERT細胞、H1876細胞

OCILY7細胞類似產品：：SNU-520細胞、PT-67細胞、Hs839T細胞

NCI-SNU-886細胞類似產品：：SJSA-1細胞、MGC-803細胞、R 2 C細胞

SU-DHL-8細胞類似產品：：CII細胞、HMrSV5細胞、MCA38細胞

NCI-SNU-886細胞類似產品：：SJSA-1細胞、MGC-803細胞、R 2 C細胞

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