"Y1:小鼠腎上腺皮質瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)
細胞生長:貼壁
有一些細胞是數(shù)量多一點比較HAO生長,生長狀態(tài)也比較HAO。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較HAO,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較HAO。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不HAO的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不HAO,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞建議只吹打,不消化)其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內,培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。通常稱之為“二傳”。如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞上乘形態(tài)。其中要注意,結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得HAO的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
Verda reno細胞類似產品::Roswell Park Memorial Institute 1788細胞、H9c2(2-1)細胞、KG1A細胞
OSRC2細胞類似產品::GL261細胞、Hep 3B2.1-7細胞、CA-OV-3細胞
SNK-6細胞類似產品::Turbot Embryonic Cell line細胞、HepaRG細胞、HL1細胞
MDCK (NBL-2)細胞類似產品::KMS-26細胞、As-PC1細胞、NCI-H69C細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
Y1:小鼠腎上腺皮質瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)
細胞形態(tài):上皮細胞樣
U937細胞類似產品::Kasumi-6細胞、Rat Lung-65細胞、SF 126細胞
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SV40 MES 13細胞類似產品::DITNC1細胞、OCI-Ly 10細胞、HCC-95細胞
常見培養(yǎng)細胞預防污染的有效措施:體外培養(yǎng)的細胞受到嚴重污染時,有時即使想盡各種辦法也難以挽回。因此,防止污染,預防是關鍵。只有將預防措施貫穿于整個細胞培養(yǎng)的始終,才能將發(fā)生污染的可能性降到Zui小程度。一般預防可從以下幾方面著手:1)添加抗生素:各種抗生素性質不同,對各種微生物的作用也不同,聯(lián)合應用比單用效果HAO,預防性應用比污染后使用HAO(但迄今尚無對抗支原體抗生素)。但反復使用抗生素會使微生物產生耐藥性,且對細胞本身也有一定影響,因此為避免誘導抗藥細菌,應定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)中的抗生素,或盡可能不用抗生素處理;2)從物品、用品消毒滅菌著手:細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹底,各種溶液滅菌除菌要仔細,并在取樣檢菌一周后確認無菌才能使用。同時,在無菌過濾操作中,隨著濾過體積的增大,濾膜破損的可能性增加,故應選擇Zui后過濾的液體進行檢測。定期對二氧化碳培養(yǎng)箱進行消毒。具體操作:75%的酒精搽拭培養(yǎng)箱后,使用可移動的紫外燈至少消毒30min,加入GAO壓滅菌過的超純水于培養(yǎng)箱水槽中保持濕度。也可配制300ml的飽和酸銅加3L滅菌超純水混合成酸銅溶液加入水槽中。
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分
貼壁細胞傳代:去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基,T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞,顯微鏡下觀察,待細胞變圓,細胞間隙明顯,部分細胞剛開始脫離瓶壁,加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化,將細胞小心吹打下來,1000rpm/min室溫離心5min;棄上清,細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代:一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,將細胞懸液移入離心管中,1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清,細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長,此時細胞生長狀態(tài)良HAO,當補液時,需避免反復吹打。
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關鍵字: Y1:小鼠腎上腺皮質瘤復蘇細胞(提供ST;
上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。